实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问现在T细胞常见的抗体有哪些？

府宅

T 细胞（全部）CD3细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞CD8细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞IFNγ, TNF分泌细胞因子杀伤性 T 细胞EOMES

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问流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞

府宅

淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞

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问目前有耗尽型T细胞的抗体吗？

dxy_gwrp7ndq

免疫T细胞彻底耗竭与DNA甲基化过程有关

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问免疫荧光染色背景过亮该如何改进？

府宅

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间

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问免疫组织化染色试剂配制和操作步骤？

dxywode

1. 标本预备①白腊包埋组织切片：由病理室通例处理②冰冻组织切片：由病理室通例处理③细胞爬片：将无菌盖玻片置于六孔板中,接种细胞,待细胞发展达到60％以上后掏出玻片,4%多聚甲醛固定2 h.2. 试剂预备①抗体选择单克隆抗体针对单一表位,具有较高的特异性,但在该表位损坏后将得不到阳性成果;多克隆抗体表位针对多个表位,可防止单克隆抗体的缺陷,但是可能消失非特异性杂交.是以,不管选择单克隆照样多克隆抗

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问做WB转膜时发现marker没转上，但是全程做完扫膜以后内参是有的，目的淡到约等于无是怎么回事儿？

dxywode

marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果，目的条带读取化学发光信号，而marker要用明场单独拍摄；如果是采用压片，显影定影，则需要提前标记。

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问做WB的时候加入抗体后条带出不来，要怎么快速判断出来是用的抗体有问题还是样本有问题？

dxy_gwrp7ndq

降低抗体浓度,增加二抗对照(不加一抗)。抗体未经纯化使用亲和纯化的抗体,减少非特异性条带。

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问免疫荧光双标操作方法以及注意事项有哪些？

府宅

两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。

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问最近跟着老师做实验，想咨询一下，做双向免疫扩散时用的合成抗原OVA~undefined的浓度是多少合适？如何控制才能得到最优结果？

dxywode

1）血清学诊断 2）免疫化学分析：沉淀线位置主要与抗原、抗体两者浓度比例有关，沉淀线靠近抗原空，提示抗体含量高；靠近抗体空，提示抗原含量多。分子量大扩散慢，扩散圈小，形成的沉淀线弯向分子量大的一边。如二者分子量相对，则形成直线。 3）抗体效价滴定：固定抗原浓度，稀释抗体；或抗原抗体双方做不同稀释医学|教育网，经自由扩散，一出现沉淀线的最高抗体稀释度为该抗体的效价。 4）分析抗原性质 5）鉴定抗原或

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问表面效应如何降到最低

府宅

可以颗粒直径的变小而降低表面效应

3 回答371 围观

问荧光免疫组化背景为什么模糊？

府宅

估计很有可能是样本制作不符合显微镜要求。

3 回答1073 围观

问1. Western blot结果中的背景为什么较高? 2. Western blot结果中无信号或显示信号弱

府宅

1. 抗体浓度过高，洗涤不充分。2. 封闭不充分。3. 使用了不恰当的封闭剂，可尝试不同的封闭剂。4. 曝光过度。5. 操作过程中膜干了。6.发光液质量问题。

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问血清与血浆该如何选择如何制备高质量样本

dxy_gwrp7ndq

可以低温：4℃；低速：人血~2000rpm、小鼠~1000rpm、大鼠~2500rpm

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问有关流式细胞术的问题

府宅

调节补偿可以选择的荧光素偶联抗体比较多，达到我们目的的补偿设置是比较容易的

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问对流免疫电泳实验不出现沉淀线的原因?

陈文豪平邑

抗原抗体在一定的pH溶液中带有电荷，在电场的作用下可发生定向移动。将抗原抗体加入pH8.6的琼脂凝.将抗体置于正极，电泳后则在两孔之间相遇，并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线。

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问我想知道制备好的抗体是不是放在4℃就可以长期使用，不用放到－20℃?反复冻融影响抗体品质吗？怎样提前预支抗体不能用了?

dxywode

1. 收到抗体后请务必在12000rpm 离心1-5min 后再打开管盖进行分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm 离心1-5min 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。即使是在10000rpm 离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2. 对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20 度 or -80 度对绝大多数抗体来说，保存在-20

3 回答1036 围观

问一般什么样的图片能够展现病理程度

dxywode

只有诊断正确，才能对症下药。正确的诊断，来自宿主、病原(因)和环境条件三方面综合分析。

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问请问老师，pcr序列分组的秘籍与小技巧都有哪些？可否分享一下经验？

dxy_gwrp7ndq

退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩増效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低 PCR 扩増效率。

3 回答521 围观

问免疫组织化学染色过程中，血清封闭能够去除的是一抗还是二抗的非特异性染色？封闭后还是有非特异性染色是不是就只能换一抗了？

dxy_gwrp7ndq

书中“组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。也可用除制备第一抗体以外的其它动物血清 (非免疫的)。有明

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问在新冠疫苗中，免疫细胞到了什么作用，为什么两到三针疫苗还没有建立有效的免疫机制？

府宅

通常第1、2针疫苗产生初始和免疫记忆，使接种者产生抗体。第3针称「加强免疫」，使产生的抗体效价更高，从而使得疫苗的预防效果更为持久。

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