实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问柱层析纯化抗体问题解答

府宅

色谱柱填装紧与否对分离效果很有影响，若松紧不均，特别是有断层时，影响流速zhi和色带的均匀，但如果装时过分敲击，色谱柱填装过紧，又使流速太慢。影响层析柱整体渗透速度分布不均，致使色素带不是整齐的环状色素带，进而增长分离各色素的时间，应在装填层析柱前用适量的丙酮润洗一下，后在装入氧化铝时应边加边敲打层析柱使氧化铝殷实，然后用真空抽滤方法，用乙醚进行抽滤至无气泡为止。

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问流式的电压如何调，怎么样是个标准

peaceful13

先用空白细胞，让细胞压在左下角的位置，然后可以用全染管样本，看一下所有检测通道电压是否在检测范围，最终上单染管确定最终电压值

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问红斑狼疮的药物治疗？

府宅

如果仅有关节或者皮肤粘膜的这种受累比较轻的红斑狼疮，我们可以在密切监测病情，不选择激素，而选择非载体药、抗疟疾药，或者沙利度胺，这些药也能让病情得到有效的控制。

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问染色细胞核不清晰是什么原因呢？

师医生说

在免疫组化染色中多使用HE染色中经常出现有细胞核的染色不清晰，1，首先要考虑是否有固定不及时及固定不完全的情况，2，细胞核着色主要是苏木素，其主要的作用要看下是否有苏木素存在结晶以及环境温度过低，3，有使用过久的苏木素染液。4，无水乙醇以及透明剂没有很好的把握时间

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问免疫荧光背景太强怎么解决

Kimser

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

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问石蜡切片如何保持固定

师医生说

病理组织切片必须经过固定才能保证后续一系列的制作过程组织标本要在24小时内尽早的固定，最好是立即固定，越快越好，另外，固定液的选择要使用10%的中性缓冲福尔马林液。固定液的量必须大于标本体积的4倍以上固定的温度要保证，至少在24摄氏度及以上的环境中操作。在操作过程中，要保证酒精脱水和进水的浓度

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问环状沉淀试验中，为何下层加特异性抗血清，上层加抗原？

小暮

从定义上看，因抗血清抗体浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。相应抗体只会与相应抗原结合，而先加抗原，抗原会与其他物质结合。这样充分特异性结合

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问白板显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色是什么原因？

师医生说

在整个反应过程中有操作步骤错误，同时要检查是否试剂在有效期内，另外，要看显色液的AB液是否没有保存在避光环境中有失效现象。同时，要观察洗板过程中是否有清洗中高浓度的清洗液而导致包被的底物浓度不够，也不排除有其他的洗板过程中的消毒液影响

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问琼脂糖凝胶电泳中在规定的时间内没有跑出很好的条带，导致染色出现不清晰，分辨率不高的情况有哪些影响因素

府宅

1、DNA降解：琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧：电泳缓冲液多系使用后，离子强度降解，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳实验，建议经常更换电泳缓冲液。3、所用电泳条件不合适：电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃；巨大DNA链电泳，温度应该<15℃；检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4、DNA上扬量过多：应减少凝胶中DNA上样量。5、DNA样含盐量过

3 回答1230 围观

问跳孔出现随机性的花板、跳孔现象是什么原因？

府宅

1.洗板机某几个加液头堵塞导致花板、跳孔。2.拍板时交叉污染。

3 回答576 围观

问在用流式分析TME中各种T淋巴细胞群的变化时，CD3这群细胞没办法从CD45中明显圈门出来，导致后面分析不够准确，请问有什么办法

Kimser

使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达

3 回答347 围观

问流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。

peaceful13

先染FVD死活，因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合，所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色，Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体，所以需要先染死活

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问请问在免疫扩散法中，根据规程最好能先将血清（抗体）样本进行补体灭活处理后再使用，如果不灭活会有什么影响呢，灭活时有什么注意事项？

dxywode

免疫扩散法：先制备含Apo抗体的琼脂糖凝胶，间隔等距离打孔，加入待测人血清，水平置于温箱（37℃）保温24或48h，抗原从孔中间向周围扩散，因凝胶板中有相应抗体，经一定时间扩散后，医学教|育网搜集整理最后在凝胶孔周围形成一圆型沉淀圈，测量其圆直径，以圆的面积大小计算血清中Apo含量。该法要求在测量圆周大小时，一定要精确到0.1mm.这一测定方法可适用于以抗体为试剂贩所有微量蛋白的测定，但易受多种因

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问针对化学发光中使用的质控品是高浓度稀释比较好？还是选择各梯度的直接商品浓度比较好

yanxiaoyuhao

质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成，用于质量控制。所以选择各梯度的会比较好

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问石蜡切片染色要到什么程度呢？虽然是半定量的一个方法，太深太浅都对数据有影响。

桐轩456

我觉得这个程度只能是自己去分辨，每一步都必须准确操作，因为染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响，再说不同染色液染色后处理也不一样，所以一般只能根据镜下观察所见予以调整，然后再根据实验室的实际情况灵活掌握。

3 回答496 围观

问通过染色进行的细胞分选一直不太成功请问注意事项？

Kimser

样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些，因为在分选过程中，血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度，并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。

4 回答966 围观

问双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?

府宅

每次试验均需设置以下三种对照：（1）阳性对照：阳性血清+荧光标记物；（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物；（3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

7 回答1614 围观

问我想设计一个实验研究的是姜黄素对小鼠作用，主要和一些介素有关，如小鼠介素2、IL-1B、IL-12、肿瘤坏死因子B。哪个最紧密？

peaceful13

你应该先搜索文献，这些因子主要跟哪些细胞相关，采取什么样的形式进行检测，需要有目标样本的确定性，再设计相关实验方法

3 回答738 围观

问ELSA时酶与抗体交联，你们一般选择什么方法，郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法试过2次，效果一般，配方按照标准配的

bqejjh123

酶与抗体交联的方法有许多种，根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠发。尤以简易过碘酸钠法更为常用。

5 回答601 围观

问免疫组化染色检查是比较前沿的一种检查方法，可以用来判断肿瘤的早中晚期嘛？

Lv花开花落

肺癌的免疫组化染色检查是一种确诊肺癌类型的检查方法。肺癌的免疫组化分析可以帮助判断肺癌患者的具体病理类型。对于缺少组织形态学特征的肿瘤，主要依靠其免疫组化，作为重要的诊断依据，判断免疫组化染色为弥漫强阳性的标准为。

5 回答608 围观

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