实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问细胞转染si-RNA时，培养基加双抗会影响沉默效果吗？

府宅

大多数不可以添加，因为增加了细胞通透性，抗生素的进入会增加细胞的死亡，但Qiagen的hyperfect系列可以

3 回答796 围观

问结果背景颜色过深是因为什么原因呢？哪些步骤需要注意呢？

菲菲飞呀飞

1）考虑一抗浓度高；2）然后调整DAB孵育时间；3）也要考虑血清封闭时间是否过短；4）适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

3 回答225 围观

问孵一抗的量是按组织面积还是体积计算？大概量为多少比较合适？

dxy_61kek75

按照面积计算，且在可以染出目的抗体的基础上尽量减少抗体浓度以减少由于边缘效应造成的组织边缘非特异性染色以及背景颜色非常强（也可以节省抗体），抗体稀释液可以覆盖组织一即可，不过，最主要的是防止染色孵育的时候抗体液风干，导致背景以及非特异性染色增强

3 回答494 围观

问如何提高细胞样本rna提取的量

bamboopiggy

注意细胞和trizol的比例，一般情况，6cm皿长满，可以用1ml的trizol，然后收完不要立即提，室温放置半小时，充分裂解后再提。

3 回答829 围观

问新型microRNA能帮助治疗肺癌吗？

府宅

肺癌中的microRNA-486是一种强效的抑癌分子，有助于调节肺癌细胞的增殖和迁移，并且诱导这些癌细胞程序性细胞死亡或细胞凋亡。有利于帮助治疗

2 回答432 围观

问怎么用T4 RNA 连接酶链接RNA分子呢？

lzy必有我师

(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA 100-500ng受体 (acceptor)RNA 250ng10XT4RNA 连接酶缓冲液

1 回答600 围观

问RNA提取，在液氮中研磨小鼠组织时，极容易把组织（如肾脏）蹦到研钵外面，有没有好的研磨方法？

bamboopiggy

将组织包到锡箔纸中，进行敲打，碎了后倒出

4 回答484 围观

问免疫组化结果如何判读？

菲菲飞呀飞

结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在4undefined光镜下，随机10个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0分阴性着色，1分淡黄色，2分浅褐色，3分深褐色）和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。

3 回答858 围观

问配胶的时候一直不凝怎么回事

whilt-shirt

有可能是配胶试剂没混匀导致，也有可能是配方问题

3 回答343 围观

问wb中杂带有很多，没法区分

dxy_gwrp7ndq

1.低效阻塞。实验中会应用到多种不同的封闭剂，某些非离子去污剂或蛋白质等封闭剂容易产生低效阻塞的影响。如果改变阻塞条件就可以解决此问题。2. 抗原浓度过低。信号增强可能会导致人工带的出现。因此可以适当考虑通过分级分离或免疫沉淀富集抗原。

2 回答401 围观

问大家都怎么防止蛋白降解啊？

whilt-shirt

1、在样品制备过程中添加蛋白酶抑制剂；2、样本用液氮保存，超低温下蛋白降解慢。

3 回答828 围观

问ELISA试剂在对不同实验的选择上，需要遵循什么样的标准？

Kimser

根据抗体类型选择：首先看是单抗还是多抗，又或者两者结合。顾名思义，多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。所以，我们应该明确捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。

3 回答468 围观

问DNA提取的注意事项有哪些？

闭门羹牛

尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈振荡、搅拌等)，细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和高温等。

3 回答1686 围观

问做小鼠基因型鉴定，条带要么不出要么出了杂带，换了很多primer，体系，裂解液。求问大神解救😭该咋办？

dxy_gwrp7ndq

可以考虑优化抽提方法，保证基因组DNA 质量。在PCR 反应体系中，基因组DNA 的浓度也会影响PCR 的效率。基因组DNA 过多或过少都有可能导致PCR 扩增失败。可以考虑调整PCR 反应体系。若PCR 鉴定出现非特异性条带，可以考虑提高退火温度，以提高引物的特异性结合。

4 回答1408 围观

问RNA定量上样的相关问题

刹那芳华2333

排枪校准好，调好不会有很大误差

3 回答342 围观

问请教关于吉姆萨染色实验的问题

bamboopiggy

注意吉姆萨燃料的浓度，可按照原来的浓度（引起皱缩的浓度），稀释后再用

2 回答533 围观

问反义RNA的制备中，如何去掉乙醇溶液？

bamboopiggy

乙醇洗涤rna沉淀后，分三次离心，第一次用1ml的枪尖吸，然后再次离心，用200ul的枪尖吸，第三次用10ul的枪尖吸，看着沉淀，逐渐由白色变为透明即可，当然也有人用65度加热5min来干燥，但是一般不推荐

3 回答416 围观

问哺乳动物细胞胞质分离RNA时，如何去掉污染的DNA？

花匠是自己

1.添加gDNA remover，这样后续可以直接做逆转！2.如果你是大量样品准备做组学，可以用不同的吸附柱提法，有试剂盒是先柱吸附DNA，去除DNA，再另外的柱吸附RNA，最后洗下来比较纯净的RNA。

3 回答537 围观

问求教RTPCR非特异性信号多的原因及解决办法？

whilt-shirt

1、引物为非特异性引物，优化扩增条件，可设置梯度Tm，摸索最佳的Tm值；2、引物浓度太高，适当降低引物浓度；3、可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体；4、模板有基因组污染，重新逆转录cDNA

2 回答335 围观

问细菌提RNA，需要培养到什么时期最好？

lzy必有我师

1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个

4 回答1147 围观

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