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问
分泌蛋白在细胞内不分泌
做生物的翔仔
首先需要确定是否真的没有分泌。因为分泌蛋白到达培养基后就相当于被稀释,如果没有做富集就很难监测到。建议通过elisa确定是否真的没有分泌。如果真的没有分泌,建议查看质粒前面的分泌信号肽是否完整。
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问
第一次养HepG2细胞,这种形态正常吗?为什么和网上的图片不一样,是因为现在细胞密度太小没长起来吗?
做生物的翔仔
这一定是Hela污染。我们组出现过相同的情况,误认为是HepG2传代多次,然而发现和ATCC照片不同,最终送去做STR结果显示是Hela。
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问
c57小鼠腹腔注射,死后眼球发白怎么回事
dxy_j619qp2
会不会是生前有白内障嘛?紫薯布丁
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问
大家好,我的蛋白条带是出现弥散现象了吗?以及,这个蛋白条带有点糊需要怎么改进吗?
做生物的翔仔
我觉得和膜有关系,你可以尝试换其他品牌的PVDF或者是NC。应该会有好一点的效果。此外我们之前的极特殊的蛋白也会出现这样的情况,例如磷酸化TBK1和磷酸化AMPK。
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问
请问大家腺病毒包装可以用293T细胞吗?
此用户已注销
请问大家腺病毒包装可以用293T细胞 吗?腺病毒包装可以使用293T细胞。293T细胞是293细胞的一个衍生株,经过基因技术改造,能表达SV40大T抗原,并含有SV40复制起始点与启动子区,这使得它在病毒包装方面有着广泛的应用1。虽然293T细胞主要用于腺相关病毒(AAV)的包装,并且表现出高效的转染效率和适合大规模培养的特点2,但也有研究表明,293T细胞也可以用于腺病毒的包装和表达3
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问
论文投稿时,是所有的结果都要进行三次生物学重复吗?还是重要的结果进行三次生物学重复?
做生物的翔仔
看期刊的具体要求。有些期刊不要求提交原始数据,有些要求提交做图的三次技术重复而不需要平行重复。有些则是需要三次平行重复的原始数据。
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问
请问活细胞成像用的培养皿有什么要求吗?
做生物的翔仔
不可以,必须使用共聚焦小皿。因为共聚焦显微镜通常需要被拍摄物接触的底部小于0.17mm,否则无法对焦。
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问
做铁死亡相关蛋白的验证,在wb收集细胞时需要把上清中的死细胞也收集上吗?
做生物的翔仔
需要,否则内参很难对齐,同时检测的相关指标很难有显著差异。
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问
求问,家兔热原实验时,供试液的浸提用具怎么能够做到既无菌又无热原
dxy_j619qp2
所以预计与供试品或供试品浸提液接触的器具均应采用干热灭菌法(250℃,至少30分钟)去热原处理,或试验火焰喷枪灭菌,或使用一次性无热原器具。
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问
跑了很多次,条带最后都是空白的怎么回事,但是内参又能正常显出来。
做生物的翔仔
BCL2也伤了我很多次,不过后来好歹是做出来了。我们的教训是一定选用PVDF,转膜时间可以短一点。这个蛋白在NC膜上不怎么结合。此外,抗体建议先富裕一下全膜。我们使用的是proteintech的还不错。
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问
WB实验中转膜时只有一块胶要怎么跑?
做生物的翔仔
另一个卡位空着就行,没有必要都加满。
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问
邻近连接分析可以取代wb吗?
做生物的翔仔
我们的经验是可以,你说的应该是可以取代Co-IP吧。我们有些内源蛋白不好抓的就是用Duolink进行补充。
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问
WB实验内参和目的蛋白要在一张膜上吗?这种情况是内参敷完抗体显完影再用剥离液洗掉内参抗体再敷目的抗体然后显影吗?
做生物的翔仔
最差要在一块胶上,转在一张膜后可以裁剪开分别富裕抗体。但是不要两块胶一块内参一块目的蛋白。如果条带距离很近建议洗膜重新孵育。
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问
原来可以表达的蛋白现在诱导表达不出来了,请问有没有同学遇到相似的问题,最后怎么解决的?感谢!
dxy_qqfjs3aq
请问你解决了吗?我最近也遇到了一模一样的问题?
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问
什么是MOI?
做生物的翔仔
非常通俗的讲就是几个病毒对应一个细胞的感染。例如MOI=10就是你加入的病毒量是细胞数量的10倍。这样的感染剂量很容易立刻达到平台期。
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问
中国卫生质量管理审稿
舌甘er
姐妹,当时是什么情况呀?我现在也遇到同样问题😢
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问
求问JBMR杂志如何交审稿费呀?急急急
老头子72I9
同问,2025年涨到$150了,必须交嘛,有的人说虽然一开始规定交,但是后期一直没提这个事儿
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问
capto core700纯化VLP的问题
dxy_8u4t2z0e
想问一下你的问题解决了吗,我最近在做纯化VLP的实验,结果裂解液中有蛋白,浓度也还可以,但是收取峰值的流穿时什么都没有。想问一下你说如何解决的呢?
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问
H9C2大鼠心肌细胞 H2O2过氧化氢造模浓度不稳定
balalaLy
过氧化氢不稳定,买回来的过氧化氢要及时分装,每管用一次。
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问
冰冻切片免疫荧光求助!杂信号特别多
Eason老歌迷
出现杂点有几个原因。1、二抗未洗净(再使用PBS多洗几次)2、孵育过程中出现了干燥现象,产生非特异性染色(注意湿盒的使用,避免干燥)3、抗原封闭不彻底(使用二抗同源血清进行封闭,延长封闭时间等)4、一抗特异性问题(换抗体,或者多抗换成单抗进行实验)。
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