双荧光素酶插入启动子之后荧光比空载低

“双荧光素酶实验荧光值异常，常见原因给你列几个方向：

1. 启动子/载体因素：截短后的启动子活性弱，或者载体构建有干扰（比如启动子和空载序列重叠 ），都可能让荧光变低；也得检查质粒质量、转染条件是否一致～

2. 实验操作细节：荧光素没避光保存、裂解液处理不彻底，会影响信号；另外，荧光信号的采集检测也超关键！要是仪器的光电探测‘不给力’，微弱荧光抓不住，结果也会偏差～像滨松 PMT 这类高灵敏度组件，能精准放大荧光信号，帮你排除‘检测误差’干扰。

要是你排查了实验流程还没头绪，不妨从‘光电信号采集’环节试试，换个靠谱的 PMT 组件，说不定能解决问题，欢迎聊聊你的实验细节呀～”

我也是，请问你知道是什么原因了吗，有什么解决方法吗

1. 空载荧光强，可以排除载体的原因
2. 启动子的截断片段做过测序吗，需要排除此原因
3. 此外，转染实验质粒和空载的条件也许确保一致

出现该情况，可能是在报告基因质粒构建上出问题，或是荧光素没有避光保存，或长时间暴露在室温下失效。

实验组插入基因后，载体变长了，荧光素酶基因表达较空载更低了，所以荧光变弱应该是正常的吧。

1. 启动子活性低a.优化细胞的培养条件，提高荧光素酶的表达量；b.更换强启动子（如SV40、CMV）。

有可能启动子和空载序列存在重叠，所以检测的比空载低