实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问外泌体的生物记物是什么？

bamboopiggy

1.电镜检测：茶托型或一侧凹陷的半球形2.Western blot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白

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问免疫荧光细胞化学双重染鱼法中，两种一抗在混合稀释时怎么保证最终浓度？

dxywode

进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy3复合物，经荧光显微镜下观察已出现特异性荧光，再进行FITC―抗小鼠IgG(二抗)的孵育，最后封片观察。其结果A抗原呈现绿色荧光，B抗原呈现红色荧光。此法应注意两种一抗在混合稀释时，抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度。换言之，混合后

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问DNA在什么条件下保存？

whilt-shirt

一般是-80℃保存，但是短期内用完的话可以放4℃

4 回答5725 围观

问DNA提取的要求是什么？总是实验失败，大家告诉一下

whilt-shirt

主要是无菌操作，尽量选用进口的试剂盒

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问Western Blot实验，条带信号弱，难以分辨，怎么改进呢

whilt-shirt

加大上样量或增加上样浓度，更换新抗体或加大抗体浓度

4 回答332 围观

问白色脂肪组织是由于那些因子而可以转化为棕色脂肪组织的呢

bamboopiggy

FGF21、PGC-1α、UCP1、PRDM16、ATGL、AMPK、PPARγ、脂连素等，都会促进白色脂肪棕色化。你可以直接找个综述来看看。

3 回答556 围观

问Western Blot杂带太多的原因是

今天摆烂了咩

杂带多的原因——上样量过高，蛋白样本降解，蛋白本身有多个修饰位点，抗体未纯化，一抗浓度过高，洗涤不完全，封闭不好等都可能导致杂带产生。

6 回答2473 围观

问跑带，条带上有圆形的白孔?

岳努力岳幸运

感觉像是湿转的wb。最可能的原因是在转膜操作的时候，SDS-PAGE胶和pvdf或者nc膜中间有小气泡。在电转液中将夹板里的海绵和滤纸都充分浸湿，而且电转液的量应该足够淹没膜，把胶放在膜上的时候沿着一边放下去，可以轻轻刮排气泡。最后把滤纸海绵都盖好后，为了万无一失，最好用圆管在上面滚一滚充分排出小气泡！

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问免疫荧光我想染3种蛋白，需要准备哪些？抗体和试验鼠。

whilt-shirt

需要对应的抗体，相关的试剂，除DAPI以外的三种波长的二抗

3 回答224 围观

问如何更好的设计RNA引物？

bamboopiggy

1.根据文献，尤其是高分文献发表的引物。2.可以用公司网站提供的序列，尤其是thermo公司的。3.primerbank直接搜

3 回答614 围观

问如何提高蛋白质提纯效率？

whilt-shirt

采用进口的专用试剂盒会提高提纯率

5 回答1255 围观

问死细胞对rna提取有影响吗

whilt-shirt

死细胞影响不大，在提RNA过程中主要还是看活细胞

4 回答4224 围观

问如何减少微生物实验操作的霉菌污染？

师医生说

有霉菌生长就会导致微生物生长的失败。首先保证实验室温，湿度。最好设置温控系统进行监控。同时高压灭菌后保持容器干燥。在生物安全柜内熟练进行操作。在操作前，要对生物安全柜进行至少40分钟的紫外线消毒和压力正常的条件下进行。

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问qpcr实验每次平行的扩增曲线都相差很大，怎么解决？

bamboopiggy

1.保证样品融化完全，混匀，且用同一个白枪尖上样。2.保证qpcr mix和引物及水混匀良好。3.复孔之间上样后，高度一致，4.盖好膜，扩增完成后，复孔的高度还要一致，没有蒸发

4 回答1511 围观

问Fluo4 AM检测细胞质内钙离子浓度，钙离子探针荧光微弱？

dxywode

Fluo-4 AM(钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存母液，浓度为2mM。用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4 AM的常用浓度为0.5-5 μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育10-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-4 AM在细胞内充分转变成

2 回答1217 围观

问用的为特异性一抗，但是对照样品却跑出来相应位置的条带，是什么原因?

whilt-shirt

有可能是样本污染了，也有可能是抗体浓度过高

4 回答270 围观

问如何保证GFP嵌合体监控蛋白质和蛋白质相互实验完整进行

dxywode

可以选用非变性聚丙稀醜胺凝胶试剂

2 回答328 围观

问如何收集带flag标签的蛋白？

wuli猫宁

可以参考本链接，个人认为讲的很全面。【Flag 、HA、GFP标签蛋白纯化介绍】https://mr.baidu.com/r/CYK6W8o4ko?f=cp&u=6f9e5f2331512afd

3 回答922 围观

问跑胶时候RNA的浓度多少比较好？

wuli猫宁

【跑胶_RN(浓度、纯度测定）】https://mr.baidu.com/r/CYMO5CUEIU?f=cp&u=1977c84f168fdd41此视频较详细，可以借鉴。

3 回答4103 围观

问Elisa实验本底颜色太重什么原因？

wuli猫宁

1、实验过程中洗涤不充分，洗后未拍干，样品观中其他成分残留或酶标记物残留解决办法：充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样和加酶的拍板的滤纸应弃去不用，不要重复使用，以免被污染。2、样品稀释液污染解决办法：弃去稀释液，重新配置。3、没有正确封闭解决办法：在样品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间就知道这么多，求其他解答。

3 回答526 围观

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