免疫荧光实验蛋白荧光太强，甚至形成非特异性的标记。背景染色无法区分阳性区域，怎么办？

如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

可能是自体荧光，想知道组织是否有自体荧光，查看在非染色区域是否有荧光即可。有些自体荧光来自固定步骤，可以避免使用戊二醛固定，或者使用含0.1% 氢硼化钠的PBS洗涤以除去游离的醛基。还有些荧光来自内源性的荧光分子，可以用苏丹黑/硫酸铜进行光漂白。

降低一抗和二抗浓度，用PBS多洗几遍

目标蛋白的荧光太强，甚至形成非特异性的标记，一些背景染色可能被误认为阳性区域，造成假阳性结果，这种情况一般出现在抗体浓度过高而漂洗又不充分的时候。多余的抗体会吸附在组织上，造成荧光图像整体高背景。

改进方法是适当降低一抗或者二抗的浓度，增加漂洗时间，一般能够有所改善。