实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问跑WB时，各通道上样蛋白是浓度相同还是质量相同？

迟C迟

western blot 要保证上样量一致，可以先进行浓度检测，通过浓度检测得出样品总蛋白量。根据总蛋白量调整SDS PAGE的上样体积，保证上样量一致。或者先行将SDS PAGE染色，根据条带大小调整上样体积也能保证上样量一致。

6 回答2669 围观

问ANP小分子蛋白20kD以下什么条件可以更好的曝出条带，经常出现白膜

府宅

很多常规的膜孔径为0.45um。你如果做小分子，17kd以下都跑掉了，那你应该试试0.2um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转，如果小分子蛋白跑过了前面一张膜，那总还有可能被后面一张膜抓到。

6 回答422 围观

问有关WB实验转膜失败的问题？

天一湖医者

你的电转条件是湿转还是半干,如果是湿转,试试变换一下转膜条件,注意一下电转液中甲醇的量,因为它是用来洗脱蛋白上结合的SDS的,而SDS多了很可能就转不上膜.一般甲醇量在15%左右.另外PVDF膜要用甲醇浸透,并且平衡时间一定要够.

4 回答1836 围观

问为什么同一张膜电泳后裁开敷不同的抗体，曝光后的条带有的背景很高，有的背景很干净？

府宅

可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。

6 回答215 围观

问凯式定氮法与双缩脲法测定时的异同。

dxy_gwrp7ndq

双缩脲法有重复性、线性关系好的优点，有灵敏度低、测定范围窄、样品需要量大等不足。凯氏定氮法进行蛋白质检测的，测定范围在0.1mgN～200mgN(毫克氮)（含氮量0.02% ～ 95%），需要的样品量也不像双缩脲法的那么大，只需要几克就行，因此，能够满足样品量不那么丰富的物质测定。

5 回答2678 围观

问干燥RNA的时候是要干燥到什么程度最好？需要保持湿润吗？

迟C迟

最后的到RNA的上一步是酒精洗涤，提取的RNA当然不是完全干燥，提取后可以用小号枪头洗出较多的液体，剩下就在空气中自然干燥；但是太干就不容易溶解，因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密。

3 回答925 围观

问加入乙醇洗涤能吹散沉淀吗？是吹散让它更纯还是会影响下一步操作？

天一湖医者

将一定量的乙醇加入之后，能够通过离心回收所有形成的核酸沉淀，并不能吹散沉淀。

3 回答522 围观

问提酵母菌和提细菌的RNA有什么区别吗？分别有什么注意事项？

bamboopiggy

酵母菌因为rna含量较多，dna含量少，所以一般用稀减法提取，细菌的一般和细胞一样，用酚氯仿抽提就可以了。

3 回答942 围观

问取材的时候没有液氮用干冰代替可以吗？

迟C迟

可以的，只要能冻住。很多生物公司运送样品也是用干冰，但是干冰的效果没有液氮好。

6 回答1711 围观

问枪头必须使用无酶的枪头，若只有普通枪头怎么处理呢？

迟C迟

要用DEPC水泡2天，再报上报纸，高压灭菌，就可以用作RNA实验了。

4 回答6686 围观

问一个基因有3个转录本，应该选取哪个反转录呢？

天一湖医者

1、带有MANE Select transcript标签，说明在ensemble和NCBI数据库中均认定该转录组是最主要，最保守和最高表达的。选择该转录本即可2、如无MANE标签，可看 APPRIS，它是相似的评价标准，P1代表最主要最相关的转录本。3、如无以上标签，可看注释，CCDS显示转录本的编码序列，与ensemble和NCBI数据库相匹配。

3 回答948 围观

问WB结果中，目的条带后面为什么有细细的条带？

未来9

可能是样品溶解不好，或存在一定程度的蛋白降解

4 回答517 围观

问检测RNA病毒，使用一步法还是两步法？

天一湖医者

一步法优点: 只需一步，反应发生在单管中，速度比两步法更快，而且需要较少的准备和操作时间。处理大量样品时易于操作，减少污染的机会。整个cDNA样品都被扩增，灵敏度更高。缺点: 同一样本只有有限数量的目的基因被扩增。另一个挑战是组分的兼容性，因为一步法需要转录和扩增之间的平衡。两步法优点: 可以分析同一样本的多个目标。逆转录步骤将样本中所有的RNA转换为cDNA，可以储存cDNA用于后续实验，检

6 回答641 围观

问染色后可以用自动细胞计数器计数吗？

whilt-shirt

可以，染色只是区分活细胞和死细胞，不影响计数

4 回答365 围观

问超滤技术的关键是膜，膜都有哪些分类，各自的特点适合的实验是哪些？

天一湖医者

超滤膜的分类有很多:按照膜组件的不同分类:有管式超滤膜，板框式超滤膜，卷式超滤膜和中空纤维式超滤膜。按照按照压力驱动形式的不同:可以分为外压式和外压式。膜材料的不同分类:有有机超滤膜和无机超滤膜两种。

3 回答511 围观

问western做p-AMPK和AMPK时，是先把一种抗体洗脱了再敷另一个，还是可以平行着分别做？

dxy_gwrp7ndq

如一抗种属来源不一致，即使分子量接近的蛋白，只要洗脱够彻底，也不会产生多条带，就可以一起做。

4 回答667 围观

问western blot，最后显影不特异，怎么办。

vae1476

没有特异条带吗？那考虑样本没问题的话，最可能出问题的是一抗，一抗的特异性决定了结果的特异性

3 回答248 围观

问请问在做bifc时，如何确定荧光发出的原因，是因为两个蛋白间相互作用，而不是因为两个蛋白浓度过高物理靠近发出的，如何界定这个浓度

天一湖医者

本实验需要设置阴性对照。即用pIB-YN155和pIB-nVC156 (VC156的N端带有atg，可以单独表VC156蛋白)。利用荧光显微镜观察时，需要调节荧光强度，在阴性对照组无荧光信号的情况下，观察实验组的荧光信号。

1 回答656 围观

问ChIP实验中需要选择ChIP级别抗体，没有ChIP级别抗体该怎么选择？如果我的实验种属比较特殊（果蝇，昆虫，植物等）该怎么选择

vae1476

实在没有的话，可以联系公司订制，但时间比较长，急的话，可以拿IP/IHC/ICC级别的抗体进行尝试

3 回答799 围观

问请问牛乳酸度的测定这个实验怎么做？

府宅

实验步骤：1.配制0.1mol/L的NaOH标准溶液：用小烧杯在粗天平上称取固体氢氧化钠0.80克，加水100毫升，氢氧化钠全部溶解，将溶液倒入200ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，充分摇匀。2.标定0.1mol/L的NaOH标准溶液：用减量法称取0.3-0.4克邻苯二甲酸氢钾，(精确到0.0001克)于250毫升锥形瓶中，称两份，加入100毫升水溶液，加三滴酚酞指示剂，用以上配好的氢氧化钠标准溶液

3 回答993 围观

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