使用快速封闭的试剂，封闭时间过长会导致一抗孵不上去吗？

不会减少封闭时间，只是为了缩短你最实验的时间，封闭时间长了没问题。

（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。

（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。

一般不会，不过不推荐封闭过长时间

封闭时间过短可能会敷不上，过长一般不会。

如果一抗封闭时间过长，非特异性的条带也会被染上一抗，这样再染二抗的时候，二抗和一抗结合，显影后背景深且非特异性条带会很多

可能会导致蛋白条带有一点扩散，也会损失一些蛋白。但是对最后结果影响不大。当然要是你目的蛋白丰度很低，不建议这么做。只怕两天以后膜上蛋白扩散加损失，连条带都出不来。

有可能把你想要的条带也给封闭了，最终获得的信号很弱或者没有