小白提问，为什么跑western blot条白出来是空白的呢？内参也是白的，苦恼死了

你说的是空心的吧？是蛋白浓度太高了，辣根过氧化物酶反应剧烈，底物消耗太快，来不及显影，荧光已经淬灭了，试试降低上样浓度。实在不行再降低抗体浓度。

有可能是没封闭好，或者抗体敷育不完全

目的蛋白没转到膜上，或者你根本没分离出来

探针有问题

如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。

a) 二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；

b) ECM底物中本身含双氧水，不稳定，见光或温度高时易失活；现配现用。

c) ECL底物没覆盖到相应位置；

d) 二抗时间过期，或平时使用不当导致二抗失活。