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问
请问鼠源的过表达载体可以转染进293T细胞吗?转染效率如何!
bamboopiggy
可以转293t,并且293t很好转,只要你动作轻柔,不要把细胞弄漂了
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问
southetn blot 最后成像时,只有maker是咋回事呀,这个实验失败了好多次,心态崩了。
bamboopiggy
你下次加个阳参吧,如果阳参能出来,说明你的实验步骤没问题,如果阳参都出不来,你可能需要改你的实验方法。
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问
wb条带弥散怎么回事?
bamboopiggy
你说的是右侧的那一团黑色吗?不是弥散,是你加抗体的时候。不知道怎么把膜给弄伤了,出现非特异结合了。
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问
两个一抗宿主都是rabbit,有没有办法共染,一个表达在核,一个在胞质,拍共聚焦
bamboopiggy
我在武汉塞维尔做过,同是rabbit,三染的,他们说可以洗掉再染。染的还不错。我估计就是加一个一抗,加一个二抗。再加一抗,再加不同色的二抗,这么做的,可能对片子制作的要求比较高。
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问
一抗没有明确标明可以做IF,但是可以做IHC,可以用来做IF吗?
未来9
没写或者说没做过IF相关实验的,应该问题不大
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问
大概多久测一次过氧化氢酶活性
未来9
测定方法中说是一分钟测一次,共测4次
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问
从左到右依次为input IgG IP组,这是不是没洗干净啊?我用PBS在垂直旋转仪上高速洗3遍每次10分钟。请问怎么解决?
bamboopiggy
是没洗干净,应该用你收细胞的的lysis洗,不是pbs洗。
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问
没有目的条带,背景很干净是为啥?
JCorona
你是做WB吗?如果是的话,那么有可能:1.抗体失效或者特异度不够,导致无法与目的蛋白结合而催化发光;2.蛋白降解(可能是自然降解也可能是酶解),小肽段一来可能失去抗原表位,二来可能电泳时跑到胶外
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问
WB有杂条带是是怎么回事?
JCorona
可能的原因:1.样品本身纯度不够;2.所用的溶剂(例如loading buffer)含有蛋白质污染;3.目的蛋白发生降解,杂带实际是目的蛋白的分解肽段
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问
做southern blot 时,在进行紫外交联仪固定时,参数应该调到多少J呢
天一湖医者
120000microjoules/cm2
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问
怎样提高Western Blot 的转膜效率?
辛勤劳动创造财富
浸泡PVDF膜5-10分钟,或者增加转膜时间,一定要注意散热,这很关键,冰融化了要及时更换。
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问
【求助】提组织RNA时,为何OD值总是小于1.8
迟C迟
RNA 260/280<1.8说明有蛋白质、酚的污染。
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问
为啥我跑的BCL-2 ,缺复氧组比对照组还多
A9032
建议重复实验,同时关注BAX,以及BCL2/BAX比值,BCL2的磷酸化水平的改变。
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问
BCA测蛋白浓度,溶液变蓝色是为啥呀,我看标准品都没有蓝色
JCorona
你想说的应该是标准品变成紫色,而样品变成蓝色对吗?我也遇到过这种情况,我推测是显色反应受到目的蛋白氨基酸序列中四个氨基酸残基(半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸)的影响。其实也不用太纠结这个,检测波长别弄错,标曲没问题就行了,这个本来就是测个大概,精确度没那么高的
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问
用慢病毒包装的方式做基因敲降,病毒滴度低,感染THP-1细胞,用puro筛选后,大部分细胞死掉了,怎么样提高病毒滴度?
喵喵喵柏
Thp-1不好转染,亲测原代细胞好转。建议重新摸puro的浓度,可能是浓度的问题,设置浓度梯度,看细胞死亡的数量。病毒滴度是包装病毒的厂家设计的,有不同种的浓度,这个应该和厂家沟通,或者提高加入病毒的量,并调整转染病毒的试剂的含量,及时换液
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问
如何从一段DNA序列得到翻译的蛋白质,并与已知DNA序列进行比对?
cxsm
你这个应该是想比对测序数据吧,个人认为没有必要换成蛋白序列再去比对。这个可以按照如下流程:1.打开NCBI的网站,一直拉到页面的最下端,在popular纵列里点击blast,2.进去页面点击核酸的blast,3.align two or moresequence勾选上,再将目标序列和模板序列复制进去,点击blast,网页就能显示比对的结果了。
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问
关于THP-1细胞培养问题(悬浮细胞自行贴壁)
丁香实验
我的thp-1前一段时间也出现了类似的问题,当时除了这种细胞,别的细胞状态也不太好。怀疑是污染了。纠结了很久,后来把那一批细胞都扔了,培养液的瓶子也换成了新的(实验室自己配的培养液,自己备瓶子装),复苏了新的细胞。现在thp-1细胞状态很好,背景干净,长的也很快。建议楼主有冻的细胞就复苏新的吧。状态好的时候多冻些——后面细胞状态可能是您手法问题(主要是血清问题最重要,您列的血清应没问题,要是黄色的
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问
PCR退火温度应该怎样设定?
luoxinlong
根据我的经验, 如果上下引物Tm值差不多的情况下,退火温度设定比Tm 低三度就可以。但如果两者想差比较大,差5度以上吧,有两种策略,取中间温度,或者进行梯度PCR. 梯度PCR很靠谱的,他的温度设定: 低温=低的Tm-3 高温=高的Tm+3。 梯度PCR 你一般拿不到条带的话 就要考虑引物和模板的问题了。
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问
如何确定尾静脉注射时针头已经进静脉?
羞菲cherry
推进时无阻力是判断尾静脉注射成功与否的标准,打得很费劲和鼓包都是没有进入尾静脉的
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问
R package DESeq2中在差异表达分析那一步怎么得到正确的比值
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