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        没有目的条带,背景很干净是为啥?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        盛夏木槿

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        11 个回答

        user-title

        JCorona

        有帮助

        你是做WB吗?如果是的话,那么有可能:1.抗体失效或者特异度不够,导致无法与目的蛋白结合而催化发光;2.蛋白降解(可能是自然降解也可能是酶解),小肽段一来可能失去抗原表位,二来可能电泳时跑到胶外

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        比你可爱

        有帮助
        1. 内参有没有,内参有说明转膜没有问题,内参没有考虑转膜是否有问题
        2. 考虑抗体是否失效,有没有其他人用过这个抗体能不能出条带;是否需要延长一抗孵育时间
        3. 二抗有没有失效,二抗敷对了没有
        4. 自己的蛋白有没有问题
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        浪子在天涯

        有帮助

        可能是一抗特异性不好,没有识别目标蛋白!

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        lyang556

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        目标蛋白浓度太低,蛋白被蛋白酶水解,转膜时间短都有可能!

        user-title

        未来9

        有帮助

        可能有以下原因,

        1.目的细胞是否表达这种蛋白?丰度如何?
        2.提取蛋白的细胞裂解液是否加入了蛋白酶抑制剂?对于磷酸化蛋白是否还加入了磷酸酶抑制剂?防止蛋白降解。
        3.是否按照抗体建议的操作方法进行实验?

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        whilt-shirt

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        蛋白上样量太低或者抗体浓度过低,建议增加上样量和抗体浓度

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        天一湖医者

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        1) 抗体加错(最常见一抗加错抗体,或二抗种属加错)。

        (2) 转膜出现了问题(常见膜放反)。

        (3) 发光液失效或不够灵敏。

        (4) 蛋白上样量过少,一抗浓度太低。

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        府宅

        有帮助

        1)抗体质量不好,换另外公司抗体试一下

        2)目的蛋白不存在特异性表达,可以换几种不同细胞试一下

        3)可能蛋白提取有问题,不能出条带

        4)可能转膜有问题,可以用丽春红染一下

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        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        抗体未能识别出目的蛋白,故未能做出目的条带

        也有可能是组分内的目的蛋白总量太少,未能达到检出限

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        Lv花开花落

        有帮助

        1、内参与目的蛋白用的是相同的二抗吗?2、洗膜3min,5-6次

        3、背景高,调整二抗浓度

        4、时有时无,请在转膜后用丽春红染膜

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        bamboopiggy

        有帮助

        没有目的条带,背景很干净,说明1.你转膜可能出问题了,没转过去。2.你抗体杂的位置不在这个地方。3.你抗体坏了

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