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        WB有杂条带是是怎么回事?

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        dxy_le6fpb1e

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        10 个回答

        user-title

        JCorona

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        可能的原因:1.样品本身纯度不够;2.所用的溶剂(例如loading buffer)含有蛋白质污染;3.目的蛋白发生降解,杂带实际是目的蛋白的分解肽段

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        喵喵喵柏

        有帮助

        1. 抗体为多克隆,所以不止一个条带。看看说明书上面的结果是不是不止一个条带

        2. 抗体不纯,混合了别的抗体

        3. 电泳跑的不好,蛋白的位置有差异

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        浪子在天涯

        有帮助

        可能是一抗的问题,也可能是蛋白被降解,蛋白酶将目标蛋白分解成若干个添加蛋白酶蛋白,而这些蛋白同样可以被一抗识别。

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        lyang556

        有帮助

        就是出现非特异性条带吧?可能是一抗特异性不强,与多种蛋白结合,更换一抗试试!

        user-title

        未来9

        有帮助

        可能有以下原因:

        1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小

        2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作

        3)杂蛋白多,建议处理目的蛋白

        4)抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体

        5)抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间

        6)二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物

        7)二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度

        8)底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间

        user-title

        小露娜i

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        一抗特异性是否不高,是否存在交叉反应;

        二抗特异性是否有非特异性结合,可不加一抗验证;

        一抗二抗浓度是否过高;

        上样量是否过大;

        封闭是否不足;

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        whilt-shirt

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        有可能是封闭不完全或者抗体浓度过高导致的

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        天一湖医者

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        ①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等),本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小,这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。

        ②目的蛋白有其它剪切本,查阅文献或生物信息学分析其可能性。

        ③样本处理过程中目的蛋白发生降解,加入蛋白酶抑制剂;样本处理在冰上操作。

        ④上样量过高,过于敏感,适当减少上样量。

        ⑤一抗特异性不高,重新选择或制备高特异性的抗体。

        ⑥一抗不纯,纯化抗体。

        ⑦一抗或者二抗浓度偏高,适当降低抗体浓度。

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        bamboopiggy

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        抗体不特异,有非特异性条带,可以试试切走,如果切不走,趋势一致可以留着。不行就换个公司买抗体。

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        Lv花开花落

        有帮助

        1、更换一抗,换单克隆的。

        2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。

        3、多封闭一下。

        4、洗膜的时候多洗几次。

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