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问
腹腔注射的作用时间多久啊?我用重组蛋白去注射鱼,探究糖脂代谢过程,2-4h是合理的吗
dxy_gwrp7ndq
作用时间同药的半衰期是一样的。
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问
请问链霉菌中做Coip如何保证蛋白活力?
bamboopiggy
做好预实验,尤其是破菌壁时注意低温。可以先按照梯度条件裂了菌,跑个wb看看,然后再进一步做ip
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问
取组织样品做WB需要灌流吗??
未来9
需不需要什么灌流是根据你们实验安排吧 和做WB没关系
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问
WB重复不出相同结果是怎么回事?
未来9
问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。
4 回答
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问
关于核酸斑点杂交的问题
bamboopiggy
不用要求那么严格,和胶接触的面为正面,你记住你铅笔标在哪一面就好,没有那么严格的反正面。
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问
难消化的新鲜组织提取出的RNA建库后QPCR不合格,有什么方法可以改善?
bamboopiggy
1.将你的组织,直接放到trizo里,再进行剪碎。2.用液氮将组织冻住后,研钵内弄碎后,再加入trizol。3.买个组织提取rna的kit,可以试试。
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问
在做印迹实验多次出现信号低的情况怎么解决?
未来9
可能的原因及建议:①你所检测的样本中不表达目的蛋白,选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性,同时查阅文献。②检测样本低表达目的蛋白,提高上样量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。③转移不完全或过转移,可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头;适当调整转膜的时间和电流。④抗体不能识别测试种属的相关蛋白,购买抗体前应当认真阅读抗体说明书,确定其是否能够交
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问
求助,生物聚类热图太大,插入论文里旁边的蛋白代号不清晰,怎么调?
xuchanglu88
这个时候可以不展示所有的蛋白代号,而是展示代表性的蛋白,一些代表性蛋白或者基因有时候就足以证明自己的point,具体操作可以使用AI进行调整。
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问
wb实验,一抗二抗怎么选择节约成本,还能得到好的实验结果?
bamboopiggy
一抗可以选大公司的,然后买一抗稀释液,因为里面一般带着防腐剂,可以多用几次。二抗,随便哪个公司都可以。也用一抗稀释液来配就好。
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问
请问间充质干细胞培养时,细胞(汇)融合度怎么判断?
bamboopiggy
就是细胞覆盖培养皿底部的面积百分比,间充质一般到80%的时候才处理。
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问
有做过基因编辑的朋友吗?求赐教
bamboopiggy
你买一个现成的质粒系统,然后加入你的sgRNA就可以了,可以去addgene看看。
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问
哪个牌子的雌激素受体拮抗剂好用啊?
bamboopiggy
AZD9496,应该是阿斯利康产的,有个叫百奥莱博的公司卖
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问
做southern时为什么用酶切产物来跑胶,而不是直接用基因组DNA跑胶呢
bamboopiggy
因为基因组DNA,需要将其切割成大小不同的片段,才能进行杂交,一般用限制性内切酶来切。
1 回答
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问
WB用imageJ分析灰度值,灰色的峰是反的为什么?之前都正常。
110徐璐
打开Image J软件→左上角file→Open 选择自己的条带图片(事先把条带弄正)
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问
构建的融合蛋白,为什么看不到红色荧光!
bamboopiggy
你质粒构建的时候,去掉你那个基因的stop code了吗?另外注意rfp的读码框别移位了。
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问
怎么提高wb结果重复性,并且让杂带少一点
110徐璐
内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。
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问
脾单个核淋巴细胞培养及进一步活性分析与分离单个核细胞后直接进行活性分析实验准备和方法有什么不同?
bamboopiggy
进行活性分析,是用流式吧?处理后,直接进行流式就可以。没有什么区别。
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问
慢病毒敲低基因,为什么PCR验证时基因表达量反而增高?
bamboopiggy
如果确定你sh没问题,那问题就在你提rna,反转,甚至是pcr的primer上。你为啥不用wb验证konck down呢?
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问
整膜敷泛乙酰化抗体,显影70kDa marker那非常黑,求大神解答,感谢!
bamboopiggy
因为marker也是不同size的蛋白制成的mix,也会和抗体起反应,所以有黑色的条带,你用的是发光试剂显影吧?可能是你的蛋白浓度太高了,把辣根过氧化物酶给消耗干净了,所以反而没有光了,就泛白了
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问
emsa实验试剂盒阳性对照没有带?
bamboopiggy
膜上的水没干,影响不大,但是你尼龙膜没有活化,影响很大,至少要TBE中活化10min。
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