WB内参总是不齐怎么办？

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

jiangyinshen

2022-03-30

细胞加药处理后WB检测蛋白表达，内参GAPDH死活就是不齐，明明BCA定量很准，但是内参条带做出来就是不齐，请高手指点

4 个回答

bamboopiggy

2022-03-31

有帮助

可能你的药物会影响gapdh的表达，你可以换个内参，actin，vinculin，tubulin都是常用的内参。

未来9

2022-03-31

有帮助

可能是选用的内参表达不稳定，需要换内参，或用总蛋白做内参

Lv花开花落

2022-03-31

有帮助

1.定量是否准。不知道题主实验室是用什么方法来进行蛋白定量。我们组是用蛋白标准品和标准曲线的方法进行定量。这种定量的方法要注意用的移液枪准不准（一个量程的话，每次加的都不准的现象要避免）；样品的浓度要在标准品画成的标准曲线中部；标准曲线的R方要大于0.99；枪头插紧，避免有气泡。配样品时要注意弹匀每个组分。

2.跑胶过程中，如果移液器无法锁定量程的话，要看一下每一枪加的是否一样。

3.选择一个适合自己实验的内参。我所知道的常见的内参有beta-tubulin, beta-actin, GAPDH。如果研究的基因与代谢相关，可能就不太适合选择GAPDH。不过也需要多试一试，内参是齐的就可以选作其为内参。

4.组织的样品不太容易定量准确。可能是因为有血液的关系，定量的时候有红色的影响。如果是这样的话就算一下内参的灰度值与上样蛋白量间的关系。再制样的时候按照相同内参灰度值的蛋白上