WB内参总是不齐怎么办？
jiangyinshen
细胞加药处理后WB检测蛋白表达，内参GAPDH死活就是不齐，明明BCA定量很准，但是内参条带做出来就是不齐，请高手指点
4 个回答
bamboopiggy
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可能你的药物会影响gapdh的表达，你可以换个内参，actin，vinculin，tubulin都是常用的内参。
未来9
有帮助
可能是选用的内参表达不稳定，需要换内参，或用总蛋白做内参
Lv花开花落
有帮助
1.定量是否准。不知道题主实验室是用什么方法来进行蛋白定量。我们组是用蛋白标准品和标准曲线的方法进行定量。这种定量的方法要注意用的移液枪准不准（一个量程的话，每次加的都不准的现象要避免）；样品的浓度要在标准品画成的标准曲线中部；标准曲线的R方要大于0.99；枪头插紧，避免有气泡。配样品时要注意弹匀每个组分。
2.跑胶过程中，如果移液器无法锁定量程的话，要看一下每一枪加的是否一样。
3.选择一个适合自己实验的内参。我所知道的常见的内参有beta-tubulin, beta-actin, GAPDH。如果研究的基因与代谢相关，可能就不太适合选择GAPDH。不过也需要多试一试，内参是齐的就可以选作其为内参。
4.组织的样品不太容易定量准确。可能是因为有血液的关系，定量的时候有红色的影响。如果是这样的话就算一下内参的灰度值与上样蛋白量间的关系。再制样的时候按照相同内参灰度值的蛋白上
天一湖医者
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1.内参的选择要根据具体的样本情况选择，没有一种内参能适用所有的组织和细胞样本。
2.内参蛋白应不受实验处理的影响，建议根据文献选择在特定细胞、特定状态下较稳定的内参；或者是同时做多个内参条带，再行选择。
3.上样前需要进行BCA实验测定蛋白浓度，以保持上样量一致。
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