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问
原代细胞种板以后发现中间部分不长或者长得不好,请问会是什么问题导致?
天一湖医者
估计你是洗的时候将细胞吹动了,有时候细胞贴得不是很牢,换液时一定要小心,轻轻将旧培养基吸出,不能吹打;加新培养基时也要注意,沿着孔璧缓缓加入,不要直接对着孔中央加进去。
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问
检测某种细胞类型中的miRNA
天一湖医者
MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒
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问
免疫组化实验过程中,切片背景过深是怎么回事?
bamboopiggy
降低抗体浓度,主要是二抗的浓度,在二抗孵育显色过程中,时不时的拿到镜下看看,如果觉得可以了,就停止孵育
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问
免疫组化实验中,如果所有的切片呈阴性,我们该怎么办?怎么确定不是假阴性?
Mani-F
仔细检查实验记录,确定所有步骤没出错,再用阳性对照确定抗体有没有问题,都没问题,那有可能切片就是阴性的。
4 回答
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问
一抗是兔来源的抗体,二抗可以用抗山羊的二抗来匹配吗?
Mani-F
不可以用抗山羊的二抗,二抗必须用抗兔的!
4 回答
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问
免疫组化实验过程中,对照组无染色,怎么排查原因啊?
bamboopiggy
对照组找确定的阳参,如果阳参无染色,证明实验过程有问题,首先看抗体的种属是否合适,如果合适,再看试剂是否有问题。
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问
提高蛋白质纯化的成功率有什么好的经验分享?
一个小哭包
蛋白质纯化工艺中的其他因素也会对蛋白质的稳定性产生影响。对蛋白质的处理步骤越少越好,在最短时间内采用最少步骤的纯化工艺才能保证得到最高产率的活性蛋白质。而且,在整个纯化过程中,蛋白质最好都保持在低温状态。一般纯化过程都在4°C进行,因为这个温度既可以降低酶解速度(在含有蛋白酶的情况下),又可以保证蛋白质的结构完整性。
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问
怎样增加蛋白样品的稳定性?
雨婷42B1
尽量减少保存蛋白的反复冻溶,可以将提取的蛋白少量分装于离心管,用时取出即可。
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问
若转膜不完全时,下一步该怎么办?
bamboopiggy
换转膜的三明治夹子,结果不可信,没有继续往下做的必要了,当然,看看抗体是不是能用,也是可以的。
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问
如果上样量超载了怎么办?
bamboopiggy
wb上样多了的话,尝试 用strip buffer洗洗,或者是降低一抗,二抗的浓度。
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问
蛋白变性后,如何可以提高保存时间?
书香雪峰
蛋白质可以保存在-20度或-80度中,避免反复冻融
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问
做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项?
bamboopiggy
用8%的胶,甚至可以用6%的胶,转膜时间要相对延长,买分子量差不多的marker,看转膜是否转过去了。
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问
蛋白的上样量要怎样根据实验的要求来确定?
bamboopiggy
一般你跑wb的话,40ug/ul就足够了,如果你要跑考染的,也可以用40ul的,但是银染,你只需要用1/6的量就可以了。
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问
为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致?同样的电压可以吗?
bamboopiggy
可以一样的电压,电压不一样,是想在浓缩胶中,将蛋白压成一条线,所以想让蛋白走的慢,在分离胶中,是为了把条带分开,这时候用低电压,其实也是可以的,就是时间太长。
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问
转膜时何为湿法,何为半干法?
bamboopiggy
湿转法就是转膜的时候,膜 胶等都是泡在转膜液中的,半干转,是做三明治夹心的时候,用转膜液赶走气泡等,然后直接加入电转仪,不用加电转液,两个方法都好用。
3 回答
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问
Transwell实验上下层培养基为什么不会相互扩散?
bamboopiggy
上下层的培养基会扩散的,但是还是有血清的浓度梯度存在的,well内的细胞在无血清的培养基中,会向浓度高的有血清的培养基中爬,尤其是带ECM胶的。
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问
犬埃立克体virb9基因的表达
Eason老歌迷
是不是,实验中某个步骤没有做好呢?回顾检查一下。
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问
细菌的SERS成像怎么做呢?
bamboopiggy
用3-巯基苯硼酸预标记细菌细胞,使其与金纳米粒子络合。对表面增强拉曼光谱进行整体整理,以生成细菌种群的全景化学图像。该方法已成功地用于研究大量细菌种群在选定植物组织上和组织中的分布。这项研究表明,SERS成像在研究复杂基质中的细菌细胞方面具有巨大潜力,在某些方面优于电子显微镜和荧光显微镜。链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33592747
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问
为什么在FAM VIC ROX CY5四个通道下,在做试剂加速的时候,FAM通道总是扩增变差?
n0y0j7
四个通道波长不一样,还是fam用的多,性能变差
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问
关于APSite问题?
Eason老歌迷
两者原理并不一样。对ssdna并无作用。不能。
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