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        犬埃立克体virb9基因的表达

        相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

        user-title

        GyroGo

        根据genbank上犬埃立克体的全基因组序列设计virb9基因的引物,扩增片段连接18t载体测序后,将测序正确的片段连接到pet-28a,使用bl21(de3)转化后表达,IPTG作为诱导剂,改变诱导剂浓度,诱导温度,诱导时间,均不表达。

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        3 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        是不是,实验中某个步骤没有做好呢?回顾检查一下。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        将转化BL21DE3后的质粒也提一下,送去测序看看序列对不对,你确定放入全长了?带了start code?同期做一个阳性对照,确定你的实验步骤没问题。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        一般是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。既然这些没问题那就考虑第二种情况,目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。

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