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        蛋白变性后,如何可以提高保存时间?

        相关实验:蛋白质复合体性质的研究

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        仰望星空973

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        5 个回答

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        书香雪峰

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        蛋白质可以保存在-20度或-80度中,避免反复冻融

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        安静的丁香生活

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        分装冻在负20,避免单独解冻。

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        bamboopiggy

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        分装保存在-20,不要反复冻融。反复冻融最多三次。

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        天一湖医者

        有帮助

        一般我们蛋白提取后,取少量定量并稀释至所需上样浓度后,加入需要的上样缓冲液变性,100度5-7min ,血清最好7min 防止变性不充分,然后负20度保存即可,注意每次使用时都要再次变性,冷凝后离心再上样。

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        未来9

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        保存蛋白质应该遵循下面这几个原则:

          1. 低温

          低温下保存蛋白质是极其必要的。低温意味着更低的能量,低温下蛋白质分子热运动较低,其内部的成键不容易断裂。另外,在低温下,微生物不容易生长,可能存在的蛋白酶的活性也会很低,这些更容易保证蛋白质的活性。

          2. 分装

          蛋白质有时候是需要冷冻保存的,但我们使用蛋白质时却是在室温或者更高的温度。冻融这一过程会对蛋白质造成不可逆的损伤。因此我们需要尽量减少冻融的次数。纯化后的蛋白质,进行分装保存,每次需要多少便融化多少,保证蛋白质样品只经历一次冻融。

          3. 浓缩

          纯化后的蛋白质尽量以高浓度保存,浓度最好在1mg/ml以上,高浓度更有利于蛋白质的稳定。高浓度的另一个好处是防止蛋白质分子黏贴在塑料或玻璃材质的管壁上。不要惊讶哟,疏水性蛋白质是很容易粘贴在管壁上的。

          4. 速冻/速融

          在蛋白质溶液冷冻的过程中,纯水首先结冰,蛋白质分子会被暴露在极高的盐浓度或pH下,这会破坏蛋白的活性。因此,需要尽可能缩短冷冻的过程。速冻可以在液氮中进行,也可以在干冰,乙醇和丙酮的混合物中进行。速冻后,蛋白质可以保存在-20度或-80度中。同样的道理,蛋白质融化的过程也要尽可能的快速,可以在温水中进行。

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