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        做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项?

        相关实验:用克隆化基因在体外合成的蛋白质分析 DNA-蛋白质相互作用

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        仰望星空973

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        用8%的胶,甚至可以用6%的胶,转膜时间要相对延长,买分子量差不多的marker,看转膜是否转过去了。

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        天一湖医者

        有帮助

        跑胶:分离胶用6%,如果要同时做内参切两快胶可以用 8%,只要根据marker把目的蛋白切进去就可以.
        转膜:大分子建议湿转效果比较好,条件可能根据仪器不同而有所不同,半干转也可以,条件也相对比较容易控制,恒流1.5-2mA/cm2,转2.5小时.对于大分子蛋白转膜液中最好加入SDS.

        user-title

        未来9

        有帮助

        1)做200kd蛋白的WB时要注意,分离胶最好选择>7%的;剥胶时要小心;

        2)转移时间需要相应延长;要做分子量参照(否则出现杂带不知道如何分析);

        3)转膜液中甲醇含量可适当降低,推荐使用湿装转膜效率更高!

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