实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问植物蛋白质的提取方法及注意事项？

迟C迟

1、将组织称重，减去EP管重量，研磨一定要充分2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃

3 回答2858 围观

问人多能干细胞培养基都需要什么成分

迟C迟

基础培养基为DMEM/F12培养基；添加剂包括碳酸氢钠400~600 μ g/ml、硒酸钠8~20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10~30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80~120ng/ml、重组人乳铁蛋白7~13 μ g/ml、抗坏血酸50~70 μ g/ml以及重组人转化生长因子lng/ml~3ng/ml。

3 回答550 围观

问怎样实现单细胞测序数据最大化

迟C迟

单细胞数据分析的第一步就是分亚群（当然前期肯定是需要先做数据预处理的），通过样本比较发现新的细胞亚群或比例差异显著的亚群。亚群分好之后最重要的一步（也是最难的一步）就是对亚群进行细胞类型注释了。我们会结合细胞类型marker基因、细胞类型注释软件和文献数据做比对的方法综合进行注释。第二步：寻找marker标志，根据自己实验数据的分类亚群，找每一个亚群特异表达的marker基因。如果某个亚群只在疾病

3 回答693 围观

问做WB，跑胶的时候，有黄色的拖尾，有一个孔甚至都直接变成黄色的了，想请教一下是胶的问题还是别的什么原因

cxsm

可能是loading buffer的PH吧

5 回答407 围观

问做MTT实验时，铺板时间太长，会对细胞有影响吗？多久时间会对细胞有影响？

cxsm

这很难说，要尽量保证细胞的生长空间和营养物质的提供

5 回答838 围观

问纸层析定性糖类物质，显色剂里的硝酸银的水丙酮饱和溶液，加多少硝酸银啊？配方:AgNO3的水丙酮饱和溶液，V水:V丙酮=1:200

天一湖医者

硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，

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问关于细胞凋亡的流式细胞术

天一湖医者

流式图有很多种，最常用的是流式直方图和流式散点图，还有流式等高线图。流式直方图只能显示一个通道的信息，流式散点图和流式等高线图可以同时显示2个通道的信息。　　流式通道　　散射光通道　　散射光通道有两个，包括FSC通道和SSC通道，一般所有的流式细胞仪均有这2个散射光通道；　　FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小。细胞体积越大，其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的

2 回答896 围观

问中和抗体实验中加病毒对照的时间及原因。

Topmicro

加病毒对照的时间根据细胞类型确定，一般用处于生长相刚达到完全融合的细胞进行病毒滴定。

2 回答776 围观

问sashimi plot 图怎么看呢，图里的线线上的数字以及不同的线连接，这些都是啥意思呢，整不明白了

天一湖医者

IncLevel1可被认作是exon inclusion level（ψ），是Exon Inclusion Isoform在总（Exon Inclusion Isoform + Exon Skipping Isoform）所占比例I 是指mapping到exon inclusion isoform上的reads数，对应结果表格中的IC_SAMPLE_1S 是指mapping到exon skippi

1 回答1328 围观

问质谱中肽段匹配打分是怎么来的，代表什么

异乡人hyq

做PMF一般得分超过60分(P<0.05)就算成功鉴定，而串联质谱，得分超过60分或者虽然没有超过60分，但是有最少一条肽段的得分超过30分就算成功鉴定。

3 回答5349 围观

问质谱中的假阳性和假阴性什么意思

lzy必有我师

我们讲的假阳性通俗一点就是并不是真正的阳性，假阴性也就说明不一定就是阴性，而是阳性，但有可能因为某种特定的因素导致其结果是阴性的。

6 回答2275 围观

问rna和探针加热变性后，在冰中速冷多久合适

大草原的小灰驴

我们一般放置在冰盒中三分钟以上。时间太短作用会不充分，无法防止形成双链结构，时间太久会可能RNA不稳定容易降解掉。

7 回答1983 围观

问核酸斑点杂交杂交真空干燥的，压力有要求吗，为什么我的东西都固定不上

天一湖医者

压力一般没有要求，真空短暂干燥后用50ulTE溶液溶解沉淀。

2 回答344 围观

问从左到右依次为input,IgG,IP。蛋白分子量是110kD，但是IP组的蛋白条带在100kD。请问这个结果能用吗？

dxy_9elsat18

可以用。IgG 家族有4类： IgG1,IgG2, IgG3, IgG4. IP 共沉淀其中一类，分子量在100 Kd 左右。

6 回答5148 围观

问本人做的罗非鱼肾脏原代分离，组织块法，传了两三代之后，瓶壁上出现这种黑色的条纹，一片一片的，请问大家知道这是什么吗？

天一湖医者

有可能是黑胶虫，如果是，可以在镜下看到虫子运动，这样就没必要救了，直接扔。如果是细菌，也能看到运动，另外，培养基会明显变浑，这也没必要救，扔。如果是细胞碎片，那就换液，常规培养，细胞状态好了之后，自然消失。或者是瓶子本身不干净！

2 回答349 围观

问蜱虫组织切片一般切多厚？为什么把厚度降低后反而切不出完整的片？

未来9

切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以 0.2 ～ 0.3cm 为适

3 回答471 围观

问请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶?

异乡人hyq

FMN可偶联的有限，FMN的结构上也有个仲胺，可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上。

3 回答449 围观

问蛋白质纯化实验过程中，标签包涵体蛋白易洗脱，怎么解决这个问题？

异乡人hyq

原核蛋白表达纯化是很容易形成包涵体的，在现阶段可以采用俩种手段，一是预防，二是复性。预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前，对表达环境进行优化的一些手段，来降低重组蛋白合成的速率。例如：密码子优化，表达温的选择，与分子伴侣或折叠酶共表达等等；而蛋白质的复性则是指：在变性条件不剧烈，变性蛋白质内部结构变化不大回时，除去变性因素，在适当条件下变性蛋白质可恢复其答天然构象和生物活性的方法。

4 回答498 围观

问刚染毒的细胞有必要做细胞恶性程度鉴定吗

dxy_u3sb70e2

可以鉴定也可以每隔一段时间鉴定

4 回答289 围观

问传代细胞培养胰酶时间问题？

Topmicro

胰酶消化时间得根据你的细胞特点来定，一般控制在1-3分钟左右，你可以每隔一分钟吹打试一下。

7 回答1377 围观

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