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问
用RIPA提取总蛋白为什么会有粘稠的不可溶沉淀?是什么?如何解决?
dxy_gwrp7ndq
产生粘稠物的主要原因是RIPA不能将所有样品全部裂解,产生的不可溶组分中主要含有核酸残团,细胞碎片(有些组织样品还含有油脂),和部分蛋白,因此RIPA提取的仅仅是可溶性蛋白,并非真正的总蛋白。
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问
如图,培养皿培养12h出来的,是什么东西?
bamboopiggy
感觉很漂亮的一个菌,这皿细胞别要了
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问
通过免疫组化或免疫细胞化学的方法检测组织或细胞中的Bcl-2,底物颜色没有变红是因为什么?
bamboopiggy
要么你反应过程中有步骤做错了,要么是bcl2在你组织中表达量低
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问
细胞进行解冻或传代后细胞的附着力偏低
bamboopiggy
可能细胞本身就是个半贴壁的细胞,如果不影响实验就这么用,如果影响实验,就用促贴壁试剂,预先处理皿底
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问
为什么细胞解冻后缺少活力,活细胞占比较低?
Topmicro
可能的原因有1.冻存方法不合适,包括冻存条件和冻存液;2.冻存后长时间未复苏;3.解冻方法不合适。4.细胞本身原因。
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问
请问细胞传代最佳密度多少
dxy_gwrp7ndq
取决于什么样的细胞了,娇贵点的、难养的除了条件控制好外,密度在1-2x105/ml为宜,一般情况下5X104至8X105都没问题,具体看你实际培养经验去了,像肿瘤类细胞那真的挺随意的了,浓度别太离谱就行了,很好培养。在进行传代时,如果是悬浮细胞,只需简单稀释即可,若需完全更换培养液只需低速离心沉淀,再悬浮于合适的培养液中即可。传代密度太低,细胞容易死亡,表现出细胞在达到增长前有较长的滞留期
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问
为什么细胞过密,状态就不好了
bamboopiggy
因为细胞不是单层了,夹在中间的细胞获得的营养物质减少。状态差
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问
请问细胞培养中长的慢不贴壁怎么办求助
bamboopiggy
1.半量换液 2.在皿底预先铺一层促贴壁试剂,试试
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问
求助!培养细胞时为什么靠近培养瓶瓶口处的细胞容易脱落?
bamboopiggy
因为那个位置你可能不好消化,导致细胞密度太大,就脱落了
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问
我养的MC3T3,刚开始挺好的。穿过两次代之后,就发生细胞成片脱落,求助
bamboopiggy
成片脱落,可能是你消化的不匀,局部细胞太多了,你换个皿,少加点细胞试试
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问
为啥细胞传两代后开始逐渐死亡?
bamboopiggy
如果是原代细胞可能不能传代,如果是永生化的细胞,可能是你加错液体。或胰酶消化太狠了
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问
细胞给药时,药物需要预热到37℃吗?
bamboopiggy
这个一般不用,只要你培养基预热了就好,加入药物也就是几ul,没必要预热,且反复预热可能会破坏药物成分
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问
细胞培养基使用前预热,哪种方法更好?
bamboopiggy
培养基在实验前半小时,从冰箱里拿出来,放入水浴,对细胞更好一些,因为细胞也是在37度培养,加入冷的培养基,会刺激细胞
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问
细胞冻存必须要用液氮吗?
bamboopiggy
用液氮保存可以10年都没问题,-80也就一年
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问
HT-29细胞越传代长得越慢是什么原因?
bamboopiggy
可能是你细胞处理的有问题,对细胞造成了损伤,所以细胞不好了,还是换一个吧
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问
实时荧光定量PCR进行HRM曲线进行分析HRM的温度条件应该如何诱导异源双链的发生?
未来9
利用PCR缓慢变性: 95℃变性5分钟,然后以 0.03℃/S速率缓慢复性至25℃,使杂合子形成异源双链
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问
在做实时荧光定量PCR中的基因分型,在扩增体系中加入石蜡油和甘油有什么样的好处?
天一湖医者
石蜡油,甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,故在发挥保护效果方面和糖类具有一定共性。须知蛋白在使用时候存在冻融情况下建议可以选甘露醇、右旋糖酐
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问
实时荧光定量PCR,扩增后进行链熔解曲线基线高且杂峰较多怎么回事?
bamboopiggy
melt curve杂峰多,说明你的primer不特异,有非特异产物的产生
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问
培养细胞时应使用5% 或10% CO2?或根本没有影响?
Topmicro
细胞培养时常规使用5%的二氧化碳,模拟细胞在体内的氧气浓度,需要注意的是氧气浓度不同对细胞相关通路蛋白的表达是有影响的。
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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