实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问关于多个质粒的共转染

loveliufudan

对于需要转染3个质粒的情况,有以下建议:1. 原则上来说,可以先用逆转录病毒质粒包病毒转染,再用脂质体转染普通质粒,或者改变顺序先脂质体然后包病毒也都是可行的。2. 但是需要注意的是,两种转染方法转染效率可能存在差异,导致不同质粒的表达水平不一致。3. 如果要求3个质粒的转染效率和表达水平都较高且均匀,最好的方式还是把3个质粒都构建成逆转录病毒表达载体,然后同时转染。4. 因为逆转录病毒可以整合到

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问肌管免疫荧光染色怎么选MYHC抗体？

loveliufudan

选择MYHC抗体可以参考以下原则:1. 如果要识别I型慢肌管,使用抗MYH7的抗体(P12883)。2. 如果要识别IIA型速肌管,使用抗MYH2的抗体(Q9UKX2)。 3. 如果要识别IIB型速肌管,使用抗MYH4的抗体(Q96233)。4. 如果要识别IIX型速肌管,使用抗MYH1的抗体(P12882)。5. 如果要识别心肌细胞,使用抗MYH6的抗体(P13533)。6. 如果要识别冬眠期或

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问TGF-β 干预肾小管上皮细胞求助

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有，之前做过tgf―β1对肾小管上皮细胞转分化作用相关性的探究。

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问糖尿病细胞模型构建

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仍以动物为主要模型，但其存在实验周期长、实验繁琐复杂、费用高等问题;近几年，体外糖尿病细胞模型的建立逐渐发展起来，同前者相比较，能去除某些自然条件下不可能或不易排除的因素，更简便、节约、快速、客观地观察实验结果。也因此，细胞模型更多应用于高通量药物及药物毒性筛选、药物代谢分析、中药分子药理学研究及药效学评价、细胞功能、受体及细胞因子之间的相互作用等研究领域。糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，

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问代谢性酸中毒需要检测什么指标！

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一般都是测乳酸值，人体的血液中检测到乳酸值超过2mmol/ L ，并且血液 PH 值低于7.35，就可以诊断为乳酸酸中毒。

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问请问中药冻干粉给细胞浓度具体怎么给？

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正常是按照有效成分算，你这个应该就是提取的冻干粉的量来算。

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问菌液酶标仪od600怎么测，需要添加显色什么的吗？

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光的吸收度A=abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm)，b为光在样本中经过的距离（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L。实对于OD600吸收度影响最大的是光在样本中经过的距离，比色皿光是横向通过，酶标仪光是纵向通过，比色皿的厚度为1cm，那么只要在酶标板中加入菌液使其深度也达到1cm（一般300uL左右），然后检测OD600的值，扣除LB本底的吸收度，就可以大致估算出

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问Chip 实验中，为什么input没有条带？ip跑出来位点不同？

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如果input没有结果，先检查样本本身是否可信，PCR反应条件/体系是否正确；然后才能进一步分析

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问研究一种药物对细胞的凋亡，测量出ic50，后续处理细胞可以直接用ic50的浓度？

粥辰辰辰辰

后续直接用ic50的浓度是可以的

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问[求助] 目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG

dxy_xextz7w2

不需要，目的基因插入也是考载体本身启动翻译，跟目的基因本事无关，但是设计引物序列时要考虑插入的目的基因不能有移码突变

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问蛋白组学研究的目的和内容是什么？与代谢组学结合可以探讨什么样的问题

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蛋白质组学是在组织、细胞的整体蛋白质水平上，探索蛋白质作用模式、功能机理、调节控制以及蛋白质群体内的相互关系，从而获得对疾病过程、细胞生理病理过程及调控网络的全面而深入的认识，以揭示生命活动的基本规律。代谢组学是是研究某一时刻细胞内所有代谢物的集合的一门学科。代谢组学主要研究的是作为各种代谢路径的底物和产物的小分子代谢物（MW<1000）。蛋白质组和代谢组能够分析得到在同一代谢通路中涉及到的

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问毕赤酵母电转涂布到MD平板上，有些菌针尖大小就不长了，只有6个菌在继续生长？

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毕赤酵母在一些含葡萄糖较高的培养基中可以生长得很好。因此，可以考虑在含有一定葡萄糖浓度的MD培养基中进行毕赤酵母的培养和生长。你可以看看是否符合条件。

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问做蛋白组学的标本有什么要求

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1、对于蛋白质溶液样本需提供溶剂的试剂成分；2、若样品中含有毒性或腐蚀性的物质，必须事先声明；3、一些病原性的微生物或具有侵染性的病变组织需进行灭活；4、用银染法进行蛋白胶染色时，应选择与质谱分析兼容的试剂，银染的样本不能进行脱色。综上可知，制备蛋白质质谱样品没有一个固定或统一的方法，应根据具体的实验目的和质谱分析的要求进行样本制备，在样本制备过程中应遵循准确记录、迅速低温的原则，最大限度的缩短样

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问蛋白镍柱纯化后透析怎么选择透析液

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透析液的选择应该根据蛋白质的性质和实验要求而定，一般来说，可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。透析时间一般在2-4小时之间。更换透析液的时间也应该根据实验要求而定，一般建议在6-8小时和10-14小时（第二天早晨）更换透析液。

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问细胞融合后为什么杂交瘤细胞无效价？

sswei

杂交瘤生成首先取决于宿主独特的免疫反应。因此，用于免疫的抗原需要引起强烈的体液反应，或者换句话说，它们需要具有免疫原性。并非所有抗原物质（蛋白质、小分子、脂质、碳水化合物、肽）都具有免疫原性。这种能力取决于抗原来源的生物体和用于产生杂交瘤的宿主生物体之间共有的同源性。

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问LC3总是跑不出来，那个大佬能指点一下，任何步骤都是按要求来的，但就是没目的条带

sswei

多查查样本的表达情况和自噬情况。

4 回答1767 围观

问SPR分子互作技术的技术原理是什么？

静心观照

表面等离子共振（ SPR ）是借助传统光学现象，利用光在不同介质中产生消逝波后与等离子波产生共振，进而可以构建生物分子相互作用的生物传感分析技术，实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用，用以检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况。

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问请问用流式细胞仪测蚊子精子死亡率，样本怎么制备

小小翻车鱼

要使用流式细胞仪测蚊子的精子死亡率，可按照以下步骤制备样本：1. 收集样品：首先，从实验对象（雄蚊子）中收集精子样品。可以采用解剖法、吸管吸取法等方法收集雄蚊子的精液或精子。2. 离心沉淀：将收集到的精子样品进行离心，以使精子沉淀在管底。可以采用低速离心，如500g，离心时间为5-10分钟。3. 清洗精子：将沉淀的精子用适量的生理盐水或PBS（磷酸盐缓冲液）轻轻悬浮，然后用吸管小心地将上层液体吸去

3 回答411 围观

问请问一下各位大神我的EMSA为什么只有DNA的量在明显减少但是看不到DNA和蛋白的结合条带？

dxy_lpzs16a8

同学你好，请问你解决了吗？是什么原因呢？

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问卡那抗性的启动子终止子在哪？

yousa的猫

想问一下答主是否得到解答了呢？我也遇到了这个问题

3 回答1528 围观

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