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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
CTAB法提取植物基因组DNA总失败,怎么做才能成功?
Eason老歌迷
我觉得你可以注意以下几点。你磨样的时候一定要使材料处于低温状态。不然啊DNA降解得很厉害。加入异丙醇后,出现的DNA絮状物给他挑出来,不要离心,不然不完整的DNA会增多。
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问
对提取出的人的全基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,胶孔总会很亮,仿佛有DNA的残留,未完全跑下来,为什么?
天一湖医者
主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物
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问
蛋白原液做完BCA放在4度过夜了,第二又测了一次BCA,结果如图,这批蛋白还能用么?
balalaLy
肯定是有降解的。BCA测浓度只是相对定量。跟BCA试剂的作用时间和作用温度很大关系。只能同一时间点测的样品间做比较,前后两次的只能看个大概。跑wb的话应该也是可以跑出来的,你就跑跑看呗。结果符合预期就当做一次重复实验呗。
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问
用KOD高保真酶做PCR扩增200+bp产物,模板含量低,延伸时间分别设1,5,10s,相对Taq酶出现很多非特异扩增,怎么办?
Eason老歌迷
可以适当的加入dmso,来增加特异性。也可以适当提高退火的温度
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问
免疫共沉淀标签的作用?
bamboopiggy
有标签,用标签抗体,比特异性抗体便宜且好用
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问
请问,提取的蛋白原液做完BCA放在4度冰箱过夜,忘记放在负20度了,还能用么,会不会谅解很多
迟C迟
问题不大,4度也不会降解这么快。长时间不用还是建议低温保存。
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问
DNA琼脂糖凝胶电泳
dxywode
电泳时间可能过长,一般75v×30min左右,但是具体看溴酚蓝得离孔距离和目的条带离孔距离。利用电泳可以确定胶体微粒的电性质,向阳极移动的胶粒带负电荷,向阴极移动的胶粒带正电荷。金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子,带正电荷;非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子,带负电荷。
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问
逆转录PCR实验中,逆转录后,一般取多少的cDNA进行后继的PCR圹增?
迟C迟
我们实验室是逆转录之前控制逆转录的量,然后PCR体系中模板量用4微升,一般不超过体系的10%。
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问
ip实验IgG组也有条带什么原因
dxywode
你的样品是否煮样? IgG的轻链大小25KD,重链大小为50KD,所以很有可能是重链。建议IP抗体和WB抗体使用不同种属来源的一抗。
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问
巨噬细胞造泡沫细胞模型?
天一湖医者
是不是细胞已经处于发炎状态了?
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问
移液枪里密封圈是什么材质的?
天一湖医者
NBR丁腈橡胶密封圈,HNBR氢化丁腈橡胶密封圈,SIL硅橡胶密封圈,
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问
PCR结果CT值多少比较适合
迟C迟
Actin的CT值一般会小一点,20左右。目的基因看表达,一般低于37/38都还能用,太低可以稀释样本。
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问
请问用trizol提取的DNA可以用于表观修饰的实验吗?(如甲基化、CHIP等)
Guoood
可以使用传统trizol 法提取DNA进行甲基化等表观遗传实验,用试剂盒纯度和浓度反而不如trizol 法
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问
请问超声随机切断DNA为什么被淘汰了?有什么弊端吗?现在这个微球菌核酸酶又有什么优点呢?
Eason老歌迷
你都说了,超声是随机切断,那肯定,没有酶切法好。它一个随机切断,没有确定性,一个是酶切,有固定位点。
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问
请问我提了牙龈成纤维细胞原代,传代时候一直在培养基中加双抗,现实验需要去除双抗干扰,但是细胞一换成无双抗培养基就死怎么办?
bamboopiggy
是因为污染么?一停双抗细胞就污染了?你要去双抗的目的是什么呢?转染?其实现在好多转染试剂毒性没有那么大,不一定非要去除双抗。
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问
Frank-starling机制在大鼠心肌上验证
bamboopiggy
这不就是生理上的异长调节么?Frank当时是在离体的蛙心上做的,你可以考虑做离体的大鼠心脏,然后改变灌流液中钙离子的浓度,来进行检测。
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问
在设计RCA环状模板时,模板长度在什么范围内合适
bamboopiggy
RCA的模板,不是取决于你实验的目的么?如果用phi29 DNA聚合酶可连续合成长达70kb的DNA片段。
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问
这个图是怎么看出结果的,我知道结果,我不知道怎么看出来的通过染色颜色的深浅嘛?求求各位大佬指路
dxywode
请问是什么图呢?上传了我分析一下。
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问
怎样判断小鼠腹腔注射是否打入了腹腔而不是肠内?
bamboopiggy
一般针头进入腹腔,不会扎到肠的,肠外面有浆膜层,会滑开,但是扎入腹腔后,要回抽一下,防止扎入血管
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问
鼠的nk细胞分离鉴定
Miracle星
小鼠外周血nk细胞分离液试剂盒,全血或者组织原浆都可以用。
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