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提取细胞的DNA后进行PCR,然后进行电泳,出现了非特异性的条带,可能的原因?

相关实验:DNA 降解断裂法检测肿瘤细胞凋亡

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lanseyaoj

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5 个回答

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迟C迟

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非特异性条带的出现跟引物特异性不高直接相关,建议重新设引物,或者多看文献,看别人发表的用的什么引物。

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bamboopiggy

有帮助

引物不特异,annealing temperature低了,可能还有一些别的原因,例如污染了。先看你的实验目的是什么

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whilt-shirt

有帮助

这种情况有可能是引物的特异性不好,建议更换引物

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府宅

有帮助

可能是DNA分解导致的非特异性条带

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未来9

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PCR扩增后出现非特异性扩增带.

其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.

其对策有:①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸).

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