迟C迟
非特异性条带的出现跟引物特异性不高直接相关,建议重新设引物,或者多看文献,看别人发表的用的什么引物。
bamboopiggy
引物不特异,annealing temperature低了,可能还有一些别的原因,例如污染了。先看你的实验目的是什么
whilt-shirt
这种情况有可能是引物的特异性不好,建议更换引物
府宅
可能是DNA分解导致的非特异性条带
未来9
PCR扩增后出现非特异性扩增带.
其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.
其对策有:①必要时重新设计引 物.②减低酶量或调换另一来源的酶.③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸).
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