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问
我是要扩增一个片段,加上双酶切位点,片段就那么大,我就需要那么大加酶切位点?这引物怎么设计?是不是只要5‘端序列,以及3’端的反
dxy_j7jezao0
5'端加上酶切位点不影响你扩增目的片段,网上用软件设计可以直观作出对引物的评价。你也可以自己设计,符合一些引物设计原则就好
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问
我设计的引物为:上游引物:TCC CCCGGG ATGGCTCCACTTCACGAATC下游引物:ATAAGAAT GCGGCC
bamboopiggy
你能不能换个酶?你选的这两个酶,全是GC的,本身就会导致TM值升高,再加上上游起始序列中GC含量也比较高,所以你换个酶比较合适。
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问
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别
dxy_j7jezao0
qPCR为保证扩增效率,产物片段较小,70-250bp,TM值一般60左右其他差别较小
4 回答
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问
实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT
dxy_j7jezao0
下游引物可以,这就是RT中所说的特异引物
5 回答
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问
荧光定量PCR熔解曲线出现多峰是什么原因?怎么解决?
bamboopiggy
一般情况是引物不特异,可能有多个产物。不能用,换个引物。
3 回答
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问
PCR实验中菌落PCR检测有条带,接种大摇后无条带
bamboopiggy
一般菌落pcr,可能会存在插入片段也转入菌种,但是没有和载体连接成功。所以一般做完菌落pcr以后,先要送测序,测序成功,才大摇比较合适。
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问
PCR实验中扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
bamboopiggy
可能产物不特异,出现多条带,但是片状弥散,可以考虑灌胶不匀,尤其是在胶中直接加入EB或GV的情况下
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问
请问 PCR引物长度24点情况下,错配几个碱基仍能P出来、基本不影响效率?
dxy_j7jezao0
不确定,引物特异性主要受3'端序列影响,错配在5'端,影响较小。
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问
跑qPCR,内参基因和目的基因CT值正常,结果也比较理想,但内参基因熔解曲线呈较宽的单峰,Tm比目的基因熔解曲线低很多,有效吗?
bamboopiggy
看图,感觉两个melt curve 底边是一样宽的,但是你如果觉得内参基因的宽,可以考虑换一个大家常用的内参基因试试,一般情况,内参基因不会出现这种问题。
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问
qRT-PCR模板稀释比例一般为多少啊?
cq2019
我都是按照1:5的比例来稀释,跑出来的结果非常好
6 回答
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问
求问qPCR的引物如何设计,一般选择哪段序列,探针法和燃料法有什么区别?
Eason老歌迷
我们聊一聊探针法和染料法的区别。通过探针可以增加反应的特异性,只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号,能够预测和提前进行反应条件的优化,它的缺点是要合成探针,成本比较高。染料法呢比较经济,可以做溶解曲线,分析全部PCR产物的M值,缺点就是特异性没有探针法高。
4 回答
989 围观
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问
定量Pcr时候怎么减少加样导致的误差
cq2019
为了尽量减少由于加样导致的误差,可以把混合液加完后,最后再加cDNA,加的时候枪头不要深入液体面,同时每加一个孔都要换枪头,最后2000r/min离心
5 回答
2406 围观
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问
求Bacmid BMON14272 图谱或序列
bamboopiggy
你可以参考一下这个公司给的说明书,他们不让我贴连接,我把pdf的头给你贴上。你自己找来看看吧
1 回答
2010 围观
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问
做动物存活率实验,一次给药太猛了,分次给药剂量如何确定?
bamboopiggy
你可以参考临床病人用这个化疗药的间隔周期,来使用。
3 回答
1782 围观
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问
已经逆转录之后的cdna,化冻以后上样扩增之前可以涡旋吗?
cq2019
cDNA还是比较稳定,可以瞬时涡旋震荡的
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2810 围观
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问
免疫共沉淀实验,总是假阳性,该如何避免
天一湖医者
免疫沉淀的假阳性一般來自洗过的免疫沉淀物中存在的某些蛋白质,这些污染物在完整细胞内不与目的蛋白相互结合,但在细胞裂解后可形成非生理条件的蛋白质与蛋白质的相互作用,也可能来自抗体与其他非目的蛋白的交叉反应,(这在做western很常见),或者非特异性反应.为了排除这种假阳性可采用几种方法:一是采用几种不同抗体.如用几种不同的cmyc抗体去IP,可增加结果的可信度,另外也可以采用对照抗体,如与你的抗体
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问
当多种病原微生物混合在一起时,用PCR反应管可同时检出多种病原微生物,怎样分解出特定的病原微生物?
bamboopiggy
你都混在一起了,是不是想说怎么分解出特定的pcr产物?这个你可以根据你的目的,设计特定的primer来进行pcr
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问
sw620形态正常吗
天一湖医者
从图片上看,这个sw620形态还是正常的。
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557 围观
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问
想问问这个算不算有抑菌效果呢?
灵枢天问
可以做一个菌落计数,菌落比正常组少的值有统计学差异就算
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290 围观
4 回答
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问
BV2细胞从公司买的,复苏以后长伪足,正常吗?还可以继续用吗?
天一湖医者
复苏以后长伪足,不正常。不可以继续用。
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