定量Pcr时候怎么减少加样导致的误差

为了尽量减少由于加样导致的误差，可以把混合液加完后，最后再加cDNA，加的时候枪头不要深入液体面，同时每加一个孔都要换枪头，最后2000r/min离心

做定量PCR首先要有耐心，我们都是每加一个孔换一个枪头，千万不能嫌麻烦。除此之外一定要记到加到哪里了，我们一般是在板上画格子圈四个孔，然后加的时候数1234。最后每一次吸取样品都要看枪头里面吸取的量大概合格不，有些枪头或者操作会导致加入量不正确

其实不光是加样导致的误差。一般可以重复操作减少误差，让重复操作最大的修正偏差，提取样品RNA时就重复，同一个样品，分别提取3份RNA，3份RNA都做反转录，所得的3份cDNA都做定量PCR检测。 对于精度要求较高的定量PCR，最好先在样品的所有组织类型内做内参基因的稳定性分析，找到表达恒定基因作为内参。

先加样品，用同一个白枪尖加同一样品，换样品，再换枪尖，所有样品打到同一个档位。然后再加酶和引物的混合物

1)用进口的枪头，以免挂壁的残液太多。

2）增大模版的上样体积（将模版稀释），每个反应中模版的体积不要小于5ul,