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问
小胶质细胞标记物IBA1跑不出来
bamboopiggy
胶用15%的,转膜时间改为300mA,至少要1h,或者2h也可以
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问
WB转膜时间与分子量及胶厚度的关系?
bamboopiggy
蛋白分子量越大,胶越厚,转膜时间越长
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问
Western Blot实验40V转膜12小时,时间太长了?有什么影响吗?
bamboopiggy
转膜一般是恒流300/400mA,然后1-2个h就可以。如果您的电流是低的,转12个小时也没有问题。
4 回答
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问
wb实验,出的条带是这样的,该怎么改善,
bamboopiggy
下面这条带ok,上面那条带,建议切宽点,然后抗体浓度加大一倍
3 回答
447 围观
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问
wb实验,应什么软件可以分析不同蛋白的表达情况?
balalaLy
一般用imageJ软件,直接网络搜索,有非安装版,非常好用
4 回答
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问
制作划痕实验 细胞密度可以是多少为合适?
bamboopiggy
大概80-90%的细胞融合度,然后划痕后,记得换液
6 回答
2381 围观
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问
做蛋白半定量怎么能标定的一致?
bamboopiggy
用内参,内参一般用的是管家基因,但是不同的处理,可能需要选择不同的内参
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问
在跑wb的时候,条带都连到一起变成一条线是怎么回事?
bamboopiggy
孔太密了,上样量太大了,导致感觉连到一起了
7 回答
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问
wb实验过程,想分析蛋白蛋白的表达情况,上样体积是否一致?
balalaLy
上样体积要求尽量一致,是为了保证每个孔在跑的过程中压力一致。不然隔壁孔的蛋白会往旁边体积少的地方歪。
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问
怎样可以让人源性星状细胞LX-2细胞能长快一点?加用细胞因子TGF-β刺激会有效果吗?或者加大培基的FBS总量?
bamboopiggy
用进口血清,如果长的太慢,可以考虑提高血清浓度到20%
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问
请问WB条带出现中间部分空白是什么原因?是转膜导致的吗?
balalaLy
如果是圆的那种空白就是转膜的时候有气泡。
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问
质粒转染,PEI的用量与细胞数有关,还是与质粒数有关?PEI的量不能超过多少?
bamboopiggy
和质粒的量有关,和细胞的数目也有关,一般细胞融合度到50%-60%开始做转染,按照不同的比例如1:2-1:8的比例来配转染试剂。
5 回答
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问
RNA的提取时260\230
bamboopiggy
可能你提取的rna的浓度低,导致260/230比值的差异小,从而值不好
4 回答
3479 围观
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问
做pcr的时候曲线没有峰值,出来的数每个孔差异很大,怎么解决
bamboopiggy
1.确定机器是好的,2,确定引物能用 ,3加样的枪和枪尖要match
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问
如果蛋白部分发生磷酸化使用普通的一抗所呈现的蛋白条带包含磷酸化后的蛋白吗?
bamboopiggy
您所谓的普通抗体是指的total的抗体吧?total抗体包含所有的修饰后的蛋白和未修饰的蛋白。
4 回答
868 围观
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问
样品-80度保存,7天前做过条带有 前天再做条带很模糊,怀疑一抗失效把显过影的这张膜敷了一次新配的一抗还模糊 一直用预制胶。为啥
balalaLy
虽说反复冻融蛋白会降解,但经验证明冻融个4,5次是没有多少影响的。所以你的这个应该不是样品的问题,抗体和预制胶的问题比较大。预制胶虽然是商品化的,但是也不是万无一失的。要敢于质疑
4 回答
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问
细胞迁移侵袭实验求助
bamboopiggy
侵袭和迁移的细胞一般铺的多少就不一样,这两者之间没有可比性。只要你的实验组和对照组有差别就可以。
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781 围观
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问
溶解曲线异常
Eason老歌迷
可能有几个原因。主峰前面出峰的话,是引物二聚体,而如果主峰后面出峰的话,一般的是非特异性的大片段的扩增。改变引物浓度,退火温度和镁离子浓度试一试。
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965 围观
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问
最近在做293细胞培养,细胞老是传着传着状态就很差了,还有不明小黑点
天一湖医者
黑点可能与以下几种状况有关:1、细胞生长过老,破碎的细胞残骸;2、血清质量不好,反复冻融的成果;3、制造培育基的pH值偏高,不宜细胞生长;4、制造培育基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;5、培育原代细胞中呈现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
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问
重组蛋白用于体外细胞培养时内毒素标准相关问题
JCorona
1.内毒素对细胞是有影响的,尤其是免疫相关的细胞,例如RAW264.7;2.一般推荐内毒素的浓度低于5EU/mL
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4333 围观
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