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CRISPR i如何设计靶向基因序列
府宅
可以在http://crispr.mit.edu/进行基因序列设计
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问
细菌WB实验的注意事项
bamboopiggy
我当时是做蛋白纯化裂的菌,可以直接用裂细胞的lysis裂就可以,但是内参,我没有做过,你要不做个蛋白定量试试
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细胞计数是自己数数比较好。还是用细胞计数仪准确
府宅
细胞计数仪更好,手动计数过程中为节省时间,只对血球计数板网格中的一个或两个方格进行计数。计数更多方格 (即更大的面积) 一般会提高结果的一致 性,但需要耗费更多时间。
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问
细胞培养一般多了不想传代,可以不加血清培养吗
府宅
要加血清, 不加就会养不活细胞。
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问
划痕实验如果用200ul的枪头划,有时候会出现一粗一细两道痕,而且有时候划痕的粗细不一致,我该怎么改善
dxy_gwrp7ndq
用200ul枪头垂直于细胞表面,由孔一端划向另一端。尽量垂直于背面的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。可以使用灭菌的直尺辅助划线
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问
WB结果分析
Eason老歌迷
是一张膜上的吗?如果不是那就可能是哪一步没做好。我看有点像是孵抗体的问题。你一抗二抗怎么孵的
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问
Elisa
Eason老歌迷
两个点是不够的,可以看看说明书
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求助|茎环法miRNA做RT-PCR内参和目的基因CT值差距大
秋秋欣欣
如果内参齐,然后目的ct值差异比较大,但是稳定的话也是可以用的
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RNA体外转录buffer
天一湖医者
其配方为400 mM Tris-HCl(25℃,pH 8.0),200 mM MgCl2,25 mM TCEP,20 mM spermidine。
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Matc-145细胞污染,请各位好心人帮忙看下是什么原因!
秋秋欣欣
橘黄色也可能是培养基里没有营养了哦,细胞看着挺正常,看不到培养基的情况不好判断
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求助,结晶紫染色后测完吸光度得到值后怎么计算啊
bamboopiggy
从板上每个孔的平均吸光度中减去没有细胞的孔的平均吸光度以减去背景. 然后再拿实验组和你的对照组比就好了。
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问
成牙分化
小布丁瑶瑶
大概需要3周喔 希望可以帮助您麽
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问
求助:流式单标峰形奇怪
天一湖医者
有可能是本身就是很多峰构成的,但由于制备液相上所连接的制备柱的规格或者进样的浓度大等因素导致峰与峰之间分离度降低,进而形成了一个单峰,而制备出来,再经分析液相检测时,原来单峰中所包含的那些峰就显现出来了;或者是在制备后回收的过程中,受热或者光照等因素的影响,导致化合物变性或者降解,也会出现这种情况。如果是前者,那么可以降低样品浓度或者调整流动相的比例,使峰得到很好的分离,也可以试试不同填料的色谱柱
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问
如果取样时间很长,半天到一天的时间,请问取样之后如何保存才适合下续提取步奏?有人遇到过这种问题吗?求指点
秋秋欣欣
取样时间长的话带个冰盒吧,取好的样先放冰盒里
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问
普通PCR跑出来的产物能定量比较么
秋秋欣欣
电泳只是能够看个大概,定量是不行的
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问
如何设计上下游引物引物,然后提质粒,并把目的基因转染到质粒里?
汤姆卜丽波
根据你目的基因的序列设计引物然后扩增,通过酶切连接,合成重组质粒
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问
实验小白向各位大佬求助:我养的HUVEC细胞周六的状态还很好,见下图,今天一早来看居然全部漂起来了,是长过了?还是有其它原因?
秋秋欣欣
应该是长过漂起来了,周六的时候就长挺多了
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鼠脾脏TH17刺激提取
府宅
建议加大一下PMA、离子霉素、BFA的量,刺激时间可以为4至6小时。
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感受态细胞为什么师兄说买来的不好用,要自己制备的转化效率才高?
balalaLy
不一定。商品化的感受态应该比较稳定吧,除非是小公司的质量有问题。
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问
混菌定量
迟C迟
可以,找到23srRNA序列,按照qPCR引物设计原则:1. 引物长度:18-25bp;2. GC含量:30%-80%,最好是40%-60%;3. 引物Tm值最好在60℃左右,上下游两条引物Tm差异不要超过4℃;4. 避免引物与目的基因之间发生错配,特别是引物3端,不要超过6个碱基;5. 避免特定碱基的连续重复,特别是引物3端出现3个或以上连续的C或者G重复;6. 避免引物自身形成发夹结构;7.
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