蛋白分子量62-21kd，忽然发现一直用的PVDF膜是0.22μm的，对结果有影响吗？

出现哑铃状的结果图最可能是你胶的问题，0.22的膜转62的蛋白完全没有问题

0.2 μm适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。0.45 μm是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。0.2um孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。

我们遇到过这种情况。也是相同的蛋白大小区域。我建议你可以试试换个浓度的胶跑，看看效果

会有影响，大于20kD的蛋白可用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，蛋白分子量62-21kd如用0.22μm的膜就会发生Blowthrough的现象。