怎么计算荧光共定位效率？？？

IPP软件操作过程：
1:打开原始图，在SET navigator 中点extract，选中green的图，在edit convert to gray 8，save为green extract and convert to gray 8。同样在set navigator中改参数为start2 点extract，在edit convert to gray 8。save为red extract and convert to gray 8

2：打开green extract and convert to gray 8，点process 中filter的对话框中选 medianundefined3（ 取平均），apply，save为 green filter median undefined3，对红图做同样处理。3：在morpholigical中选tophat，下面有undefined3，undefined5，和undefined7，选中任何一个，点右上角的图可以看原图和处理后的图的差别，选一个合适的，我选undefined5， apply。Save green tophatundefined5。对红图做同样处理。

4打开green tophatundefined5，点measure，点count size，对话框中选manual，点select range，自动出现一个range，若为0-49 ，则我们该为49-255。

5打开04green，和green filter median undefined3，在process中选operation，选and，image。这样得到原始图density的数值。在count size中同四处理，在count size的时候不要选measure objects，选了有时不显示count的数值只是这次一density为指标做筛选。

6打开处理后的两张图，process中选择color composition,与原图比较，看处理的对不对。

7打开处理后的两张图，在process中选者restricted dilation ,seed image 选06 green (count_size_average_density_75).tif，mask image 选06 red (count_size_average_density_72).tif Interation 选255(只要部分共定位，通过反复的覆盖，全选中)，4-connect。

在ImageJ菜单下Analyze，Plot Profile（快捷键Ctrl+K）可以找到Plot Profile工具。

Plot Profile只适用于线（Line）和矩形（Rectangluar）选框，表示线段和矩形选框所经过的范围内的灰度变化：

对于仅含有红绿蓝三通道RGB格式荧光图片，可在ImageJ菜单下Image，Color，Split Channels，得到Red，Green，Blue三通道的图片。含有除红绿蓝三通道以外的RGB格式荧光图片，无论有多少个通道也只能拆分出红绿蓝三通道，因此需要拍摄的时候保存为多通道图片。组合通道Image,Color,Merge Channels后可以得到多通道的荧光图片。

此时再使用使用划线工具或者矩形工具分别对对应荧光通道进行Plot Profile，分别得到矩形范围内荧光强度变化，导出数据绘图即可。