求教，大片段目的基因（6700bp）如何获取？
dxy_2cic6tye
大约6700bp的基因可以通过PCR法获取吗？若可以，实验中有何注意事项？程序应该如何设置？或者有何别的更优方法来获取目的基因吗？求教🙏
3 个回答
府宅
有帮助
可以根据数据库选择表达量高的部位进行模板制备，这样的话，也比较容易扩增出来；
可以分成两三段就可以了，选择合适的酶切位点；
再次，选择高保真的聚合酶，这样扩增出来不容易出现突变，可以适当提高循环数，增大产量，可以设置梯度PCR，寻找最优的条件。
dxy_gwrp7ndq
有帮助
可以分段扩增。比如分成5－10个PCR，每段扩600－800bp，设计一些overlap的区域。最好这些区域中含有唯一的酶切位点，然后通过连接酶把基因连起来
秋秋欣欣
有帮助
可以用限制性内切酶来获取，如果是已经知道序列的基因的话
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