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原代神经元培养过程中聚团脱落是为何
Eason老歌迷
可能有多种原因:1.消化不完全,或消化时间不够,都会出现聚团的现象。2、有些细胞就是有相互聚集的特性,这个很难解释,即使吹打均匀,细胞在贴壁时候也还是会聚集在一起。你参考一下和你培养相同细胞的朋友,看看他们是否也是这种情况。3.接种密度过高,稍微降低密度试试。4.瓶子没洗干净。换洗的培养瓶试试。
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问
镍柱层析后收集蛋白溶液怎么保存?
bamboopiggy
pbs透析后,放-80保存就可以。不要反复冻融
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问
卡介苗培养污染酵母菌
天一湖医者
严格无菌操作,试验前要用75℅酒精喷撒并擦拭超净台和所用器具以及双手,操作时尽量在火焰前操作,外植体消毒要彻底,消好毒的外植体无菌水洗过后一定要注意不能再污染,可放火焰前方,并且手尤其不能在上面晃动,接种时要将镊子、刀子及盛培养基的瓶口烧好,镊子冷却后(可在培养基上蘸一下快速冷却)尽快将外植体45度角插入培养基,然后再稍烤一下瓶口盖上盖子。另外,无菌操作还要注意各种物品在无菌操作台上的摆放,要整洁
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问
蛋白无活性
bamboopiggy
你是用什么方法判断活性的呢?裂菌后,活性跑到沉淀中去了,感觉是不是形成包涵体了?
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问
TLC问题
天一湖医者
最有可能的就是展开板不均匀,薄厚不均一,或者有气泡存在
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问
PCR没有想要目的条带只有其他条带
天一湖医者
最常见是引物不特异,如果引物与模版其他地方结合,扩出来的指定不是你想要的大小;其次考虑模版问题,如果模版本身有大规模重复(很长的重复或串联重复),扩出来的东西也可能会多一段或少一段。然后考虑酶的活性,
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问
[求助]bv2细胞的状态鉴别
Eason老歌迷
你这明显是细胞老化死亡碎片,建议一个是掌握好细胞传代时机,不然它很容易老化。第二个培养基要合适,ph值不合适,细胞很容易长不好。
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问
请问收到细胞株以后开始实验之前该如何保存?
bamboopiggy
看是干冰或液氮运送的冻存细胞还是放到培养瓶里的活细胞,如果是冻存的细胞,且液氮或干冰还在,细胞没有化的话,可以直接冻存保存。如果是培养瓶给的活细胞的话,要把培养瓶内的培养基倒出来,留10ml,放培养箱培养至少6个小时,最好24小时后,常规冻存和传代就可以。
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问
细胞周围的小亮点是啥
bamboopiggy
那些小亮点可能是细胞碎片,但是我实在看不清楚到底是什么样子,如果细胞增殖速度变慢了,可能是支原体污染。
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问
外泌体保存
天一湖医者
要验证血液外泌体里的目的基因,可以直接保存血液。
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问
请大佬看一下qpcr amplification plot曲线
天一湖医者
一是扩增信号太弱,经系统矫正后,就产生这样抖啊抖的线,小 V 建议大家提高模板浓度重复实验。二是仪器本身的问题,可能在扩增过程中仪器出现了波动或者本身该检测孔出现了异常。
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问
提RNA后测浓度,260/280在 2.16,260/230在1.47这个RNA还能用不,用于逆转录
bamboopiggy
凑合能用吧,260/230 1.47 有机溶剂污染,可能测到的rna的浓度比实际的浓度要高
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问
问一个离大谱的问题吧,细胞培养箱里有芥末油味怎么去除
bamboopiggy
把孵箱里的东西都拿出来,把孵箱内壁和搁板都擦干净了试试。实在不行放点活性炭吸一吸
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问
细胞DNA的提取一般用什么方法?
bamboopiggy
看你的实验目的,有专门提细胞genomic DNA的kit,如果是单纯做个genotyping,可以用鼠尾裂解液。
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问
请问有人在用CAR慢病毒转染Jurkat 细胞吗?为什么转染之后扩增这么难,还死了一大片。
Eason老歌迷
正常,这跟细胞上病毒受体表达的多寡以及细胞的抗病毒能力有关,这两个原因一般无法克服。给提供几个常见的解决方法。一个是加助侵染试剂。二是浓缩病毒,4摄氏度,10K蛋白截留柱离心浓缩,提高病毒滴度后在感染,可以提高感染阳性率。三是分选阳性细胞,一般情况下,慢病毒感染Jurket、THP1这种有免疫能力(指的是分子免疫抗病毒能力)的细胞,基本上不可能做到100%感染,如果你感染以后有分选标签,做一个流式
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问
GSEA分析数据的NES值怎么看?正负分别代表什么?
Eason老歌迷
由于ES是根据分析的数据集中的gene是否在一个功能gene set中出现来计算的,但各个功能gene set中包含的gene数目不同,且不同功能gene set与data之间的相关性也不同 较data set在不同功能gene set中的富集程度要对ES进行标准化处理,也就是NES,NES=某一功能gene set的ES/数据集所有随机组合得到的ES平均值。值为正,表示某一功能gene集富集在排
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问
我这小鼠怎么了
bamboopiggy
不做病理,看不出来,只能考猜。感觉你这个肝脏缺血,肿大
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问
转染质粒带绿标的细胞可以做流式细胞周期吗?急
bamboopiggy
可以做啊,PI 的488和GFP不在一个通道。空载也是带绿色荧光的,所以没法排除。
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问
慢病毒感染细胞时一定要用polybrene吗?
Eason老歌迷
Polybrene是带正电的小分子,它可以抵消病毒囊膜和细胞膜表面的阴离子,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常加入polybrene能提高感染效率2~10倍。其实,非VSVG包膜的病毒不用polybrene,这个具体情况要具体分析。
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问
高尔基染色
Eason老歌迷
你可以看看说明书。一般动物不能灌注,(灌注会造成阴性结果)直接处死取脑,水洗一下,放入1,2混合液,(24小时换液),避光,室温14天。
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