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        RT-PCR的相关问题?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        lyang556

        请问做RT-PCR,把RNA反转录成cDNA,合成第一条链后就可以直接做实时定量pcr,为什么不合成第二条链后再做实时定量pcr,做实时定量只需要合成一条链就可以吗?

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        只合成第一链就可以做RT-PCR,随着扩增过程,会形成第二链的。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        可以的,完全没问题。只是咱合成的时候都是那第一条链当做引物合成链,用第二个和第一个似乎大同小异

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        RT-PCR中合成第一链cDNA为RNA和DNA组成的“杂双链”,在设计PCR的引物时候也是根据cDNA第一链设计的,因此将第一链cDNA可以用来PCR。

        第二链cDNA是在第一链cDNA的基础上使用RNAase将RNA消化,利用百度百科上的几种方法合成与第一链cDNA互补的第二链cDNA,此刻就是构成了真正的,不包含RNA的“双链cDNA”,对双链cDNA修饰后用于构建cDNA文库。

        当然合成第二链cDNA后也能用作PCR反应

        所以合成第一链cDNA用来PCR可以,想要再合成第二链cDNA做PCR也可以。

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