如何选择合适的elispot试剂盒，要做疫苗抗体效价检测

1、查找待测样本的蛋白浓度

　可以通过NCBI的文献，给出的蛋白表达量参考值来比较elisa试剂盒给出的样本值与报道值是否一致。

2、试剂盒的应用种属、检测样本的种类

　　除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用。

3、•.检测范围：

•建立线性范围：需测定9-11个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次。

•验证标称线性参数：需测定4-6个浓度水平，每个浓度水平重复测定3-4次。

•所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。

4、试剂盒的其它指标

a. 灵敏度：

•示例：人IL-13的低可检测浓度为0.1 pg/ml(6 次独立实验的平均值)。10 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两倍SD，计算低可检测浓度。

•注意：灵敏度跟检测范围低点不相等。

b.•稳定性（重复性、精密性）

•酶标板内精密度3 个已知浓度的样本酶标板内重复测定 20 次，评估酶标 板内的精密度。酶标板间精密度 3 个已知浓度的样本酶标板间重复检测 6 次，评估酶标板间的精密度。

•试剂盒一般板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% （统计学概念）

虽然有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。in-cell Elisa和酶联免疫斑点elispot是两种特殊的类型，in-cell Elisa需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。elispot有点像蛋白印迹western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行Elisa实验。