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microRNA minics转染
balalaLy
有可能转染失败,刚转染的时候看到的淡淡的是没有转染进去的mimic,时间长了这些rna降解掉了就没有荧光了
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问
急求小鼠大脑中动脉位置图,有动物解剖标本图做好
天一湖医者
小鼠大脑中动脉的解剖学位置图。
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问
求助:SY5Y细胞培养问题
Eason老歌迷
用显微镜观察,看看游动不游动。不游动,它可能是细胞碎片,如果是游动的,就说明有细胞污染。我感觉你这个是传代时机不对,细胞老化,产生的碎片。
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问
关于细胞复苏传代的问题
Eason老歌迷
细胞密集的地方,新生细胞没有办法找到贴壁点,细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降,容易被竞争去贴壁的行列,从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀,不要有抱团的。另外就是及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长的过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。
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问
如何在linux系统中循环批量处理序列文件
Eason老歌迷
一、批量在文件某行插入内容: find -type f -name "*.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/abbb/' find -type f -name "*.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/ibbb/' 其中a表示在包含"aaaa"的行后面一行加入"bbbb";i表示在前面一行加入。 二、批量替换文件内容: find -type f -n
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问
MTT实验
Eason老歌迷
我也遇见过这样的情况,我在同步化24小时以后加药,分不同时间点,短时间点比如4小时,没有这样的情况,但12小时或24小时就出现变黑,有时是个别孔,有时是整个扳子,后来我缩短了同步化的时间,时间点也尽量缩短,就避免了这种现象。当时我的感觉是细胞长期处于无血清状态下已经死亡了。
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问
Western Blot转膜效率低怎么办?
Eason老歌迷
你是用的半干转还是湿转,你的蛋白是多少呢?如果要是大蛋白可以试一试湿转,效果更好。你的转膜液用几次更换呢?也可以增加转膜时间试一试。
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问
WB实验显色或曝光后无条带原因在哪儿?
Eason老歌迷
可能有几个原因,一个是你的转膜没转好,或者是转膜时间太长转过了。二个是你剪膜直接把目的条带剪掉了。三可能是你孵抗体没孵好,或者是一抗二抗选错了。四可能是你的显影操作有问题
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westernblot配胶问题
Eason老歌迷
没啥区别,我都是用过的。之前用无水乙醇,后来该用的水。无水乙醇效果更好一丢丢
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问
wb检测蛋白时,过曝的话,结果还可信吗?
Eason老歌迷
建议你重新跑吧。要么降低一下你的上样量,或者是稀释你的抗体倍数,或者是减少你的曝光时间
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问
WB检测蛋白,条带大小与理论大小不相符,什么原因?
Eason老歌迷
如果蛋白大小和预测值有明显倍数关系,那就要考虑一下这个蛋白是不是二聚体或者多聚体啦。
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问
每次曝出来的片总是中间空心,想不通是为什么
Eason老歌迷
可能是你转膜的时候,你的膜和胶之间有气泡,你没赶走。
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问
BCA调完上样内参还是不齐什么原因
Eason老歌迷
调整上样量,如果还是调不齐,建议做灰度扫描,将目的蛋白的灰度值比上对应的内参,这样比较准确,目前很多文章的western图都会附上相应的灰度扫描结果,这样更加定量和直观。或者你配的胶的问题,可能没凝好。
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问
如何成功高效的富集聚糖和糖肽以完成糖蛋白分析?
Eason老歌迷
通常使用氨基或者酰胺基柱等极性基团小柱来进行富集。使用MonoSpin Amide可以富集酸性,中性和碱性化合物。通过使用MonoSpin形式整体硅胶小柱。
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问
蛋白疏岁水性较强,需要加助溶剂才能提取出来?
Eason老歌迷
既然是提取那肯定是有沉淀和上清,目标蛋白的分子量是应该知道的,那么跑电泳先看它到底是在上清还是沉淀里,剩下的问题你再解决如何提取。对于不同的酶要看酶稳定如何,可以用不同的PH去提取,曾经提取一个酶用水就是提取不出来,需要用盐才能提取出来,多试试,设计个方案,这样才能解决问题,所以不一定加甘油就管用,还得注意破碎本身会不会有问题,倒回去做做也许能找到真正的原因。
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问
通过 iTRAQ/TMT 实验筛选到的差异蛋白,如何挑选验证?
Eason老歌迷
如Western blot、ELISA 、PRM(平行反应监测),该方法是基于靶向的蛋白质组学,研究特定蛋白的表达变化。也可以用代谢组学,基因组学等多组学互相验证。
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问
请问背景颜色深,目的蛋白颜色浅是因为什么?
Eason老歌迷
可能是你的封闭没有封闭好,也可能是目的蛋白表达量太少了,或者是你转膜没转好
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问
蛋白质免疫印迹实验转染时间多长?
Eason老歌迷
你说的是转膜?转膜看你是半干转还是湿转,半干转快30分钟,湿转可能1-2小时
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问
请教测组织的hif-1a蛋白
Eason老歌迷
跑wb就有几个比较关键的步骤,一个是一抗二抗的选择。然后就是你转膜好不好,可能是时间没掌握好就跑过了,没转上。或者是你抗体的孵育有问题。
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问
想问一下wb对称得条带围着一个中心变浅是因为什么原因呢?
balalaLy
可能是转膜的夹子夹不均匀,导致中间部分比较松,没有把所有蛋白都转到膜上面去
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