实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问曝光总是条带附近背景很高是怎么回事？

天一湖医者

抗体浓度过高。如果使用过高浓度的抗体，它们可能与印迹膜发生非特异性结合。这将导致整个印迹的均匀高背景。

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问在薄层分析等电聚焦的方法中，有哪些方法可以进行pH 梯度测定？

天一湖医者

等点聚焦电泳的测定pH梯度的方法有四种：1. 将胶条切成小块，用水浸泡后，用精密pH试纸或进口的细长pH复合电极测定pH值，然后作图。2. 用表面pH微电极直接测定胶条各部分的pH值，然后作图。3. 用一套已知不同的pI值的蛋白质作为标准，测定pH梯度的标准曲线。4. 将胶条于－70℃冰冻后切成1mm的薄片，加入0.5ml 0.01M KCl，用微电极测其pH。

2 回答411 围观

问免疫组化和WB操作可以用同一种抗体吗

天一湖医者

如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。

3 回答395 围观

问WB样本扩散了，怎么办

Eason老歌迷

是不是你的上样时间太长了啊，上样一定要迅速。。你同时跑几块胶呢？既然已经扩散了,那么就赶紧调高电压,跑完看看吧,不行就在跑一次吧

3 回答502 围观

问上下槽缓冲液有何要求，怎样才能达到最佳效果？

天一湖医者

无特殊要求。但一般是上槽放新鲜的缓冲液，下槽可以是重复使用过一两次的缓冲液。

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问甲状腺癌细胞不明原因干瘪死亡

Eason老歌迷

感觉是你的培养基不适合,或者是缺少了某个东西，ph值不对?

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问这是不是脂肪细胞呢？！

Eason老歌迷

可能是，一般是80%的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的牛前体脂肪细胞接种后1~2d生长缓慢,3~8d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降。经胰岛素诱导分化过程中,会生长的很快

1 回答285 围观

问中性粒细胞体外培养聚团

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是细胞离心速度过大或时间太长。或者是你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。可能是状态不好、老化的细胞。或者是传代时没有吹打均匀，细胞团多。

2 回答1990 围观

问抑菌率实验求助

Eason老歌迷

一般不用。早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um，不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um，所以血清中一般没有支原体的污染。

2 回答383 围观

问斑马鱼茜素红染色求助

Eason老歌迷

这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛;或者组织在甲醛中浸泡时间太长;或者久置的甲醛变性分解为甲酸。要么使用新鲜的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组织可考虑再次固定；对于已经制出的片子，染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上，然后自来水漂洗5min，可改善染色

1 回答1892 围观

问求助：这是金黄色葡萄球菌吗？

Eason老歌迷

显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。

1 回答466 围观

问求助：SY5Y细胞培养问题

Eason老歌迷

用显微镜观察，看看游动不游动。不游动，它可能是细胞碎片，如果是游动的，就说明有细胞污染。我感觉你这个是传代时机不对，细胞老化，产生的碎片。

2 回答320 围观

问关于细胞复苏传代的问题

Eason老歌迷

细胞密集的地方，新生细胞没有办法找到贴壁点，细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降，容易被竞争去贴壁的行列，从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀，不要有抱团的。另外就是及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长的过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

3 回答584 围观

问如何在linux系统中循环批量处理序列文件

Eason老歌迷

一、批量在文件某行插入内容： find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/abbb/' find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/ibbb/' 其中a表示在包含"aaaa"的行后面一行加入"bbbb";i表示在前面一行加入。二、批量替换文件内容： find -type f -n

1 回答313 围观

问MTT实验

Eason老歌迷

我也遇见过这样的情况,我在同步化24小时以后加药,分不同时间点,短时间点比如4小时,没有这样的情况,但12小时或24小时就出现变黑,有时是个别孔,有时是整个扳子,后来我缩短了同步化的时间,时间点也尽量缩短,就避免了这种现象。当时我的感觉是细胞长期处于无血清状态下已经死亡了。

2 回答811 围观

问qpcr要测RNA浓度吗orz

秋秋欣欣

需要，逆转录的时候需要根据浓度计算加样量

4 回答764 围观

问如何成功高效的富集聚糖和糖肽以完成糖蛋白分析？

Eason老歌迷

通常使用氨基或者酰胺基柱等极性基团小柱来进行富集。使用MonoSpin Amide可以富集酸性，中性和碱性化合物。通过使用MonoSpin形式整体硅胶小柱。

2 回答372 围观

问免疫荧光一定要用共聚焦显微镜看吗？

秋秋欣欣

普通荧光显微镜也是可以看的啊。

3 回答1414 围观

问想问一下wb对称得条带围着一个中心变浅是因为什么原因呢？

balalaLy

可能是转膜的夹子夹不均匀，导致中间部分比较松，没有把所有蛋白都转到膜上面去

5 回答302 围观

问慢病毒液一定要浓缩吗？

一条咸鱼_

要，通常需要浓缩病毒颗粒以获得高滴度，特别是需要感染大量细胞或者用于某些对转导具有抵抗力的细胞系时。

3 回答617 围观

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