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我用ppic9k质粒转化到GS115中,经过遗传霉素筛选,菌落PCR验证是有条带的。
但是我表达以后,甚至到120h以上都没有任何条带,不说目的基因,连杂带都没有一个,请问各位大神有知道的吗?在这里卡很久了,
汤姆卜丽波
菌落pcr有条带说明不了什么,因为它假阳性率很高,还是要送测序看看重组成功了么,然后诱导转化
Eason老歌迷
可以试试一条用5‘AOX1,一条是你自己目的基因的特异性引物批一下,这样可以鉴定非定向克隆。这样应该就能比较准确的鉴定出是否将目的基因转进去了。