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问
wb检测,荧光标记的二抗灵敏度高,还是化学发光灵敏度高?
whilt-shirt
理论上荧光比化学发光灵敏度要差一点,但是现在很多好的文章都会用荧光二抗
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问
SDS-PAGE实验的问题?
whilt-shirt
有可能是浓缩胶没配好,建议重新配胶试试
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问
WB实验凝胶的问题?
whilt-shirt
是不是其他试剂过期了,建议更换新的试剂试试
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问
蛋白拖带特别严重,是什么原因呢?
dxy_onb1bnxq
有可能是转膜的问题,转膜转花了,也要可能是蛋白降解了,出现亚带
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问
显像时背景很脏而且marker很浅
Eason老歌迷
如果背景脏,可能是你的封闭时间太短了,可以适当延长,也可能是你的抗体浓度太高。maker在转膜后很清晰,但是孵育完抗体就变淡,我也遇到过,我觉得不影响显影就没事。
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问
PCR结果重复不出来是为什么。
Eason老歌迷
首先,确认你的引物和模版,buffer和Taq酶没有拿错别的。其次,你的引物和模版是如何保存的?会不会因为保存不当而降解了。具体方法就是拿别人的模版或者已知有效的模版再做一次,如果是质粒,可以直接抛个电泳,如果是cDNA之类的,可以用GAPDH之类的做一下看看。第三,用别的仪器做一个对照,看看仪器的升降温是否出了问题。
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问
怎样保存2-D凝胶?
dxy1750
4度冰箱保存,可以放2周左右。
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问
求助:请问细胞中合成一个酪蛋白至少需要哪几种氨基酸?无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白吗?
Eason老歌迷
你如果需要知道某种蛋白由哪些氨基酸组成,你可以去NCBI Protein数据库,我们一般称为NR数据库里查。无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白。
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问
请问,我想做流式细胞术检测细胞凋亡,用7aad比较好,还是PI比较好。BD的PI双染最近搞活动便宜,用7aad的话得买国产的。纠
balalaLy
用PI吧,比较大众,而且操作简便
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问
核酸电泳环状PCR产物两条带
Miracle星
应该是片段降解了或者这个估计是引物带,PCR反应的时,退火温度,引物系列等都会造成引物带,还有可能是非特异性产物
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问
重组阴性对照长了很多菌?
Miracle星
重新再做一次,会不会是环境因素:做过三个地点的排查,一是常做实验的实验室,二是通风好的地方,三是超净台
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问
DMSO药物配置!求解答
Miracle星
DMSO能与水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯芳烃化合物等任意互溶,但不溶于乙炔以外的脂肪烃类化合物可以说二甲基亚砜溶解性很好,具体用什么稀释看你的反应体系 了 一般水就可以
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问
大鼠因为中暑死亡表现是什么
balalaLy
一开始会比较兴奋乱跑乱抓,慢慢的活动性下降。
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问
WB制胶,插梳子后有气泡还能用吗,需要重新配置吗?
sophomore
最好重新配制一块胶,有气泡的要是勉强使用肯定会影响实验结果,条带不会跑出来,更不会很好看。拔梳子不要太快,太猛。
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问
同时跑的同样品的内参差别有点大,这是什么问题呀?
dxy_u7ff8bo
其实也是正常的,我经常也跑出来这样。如果是不同的内参,就需要预实验,看哪个内参更稳定,更适合你的样品,就用哪种内参。如果用的是同一种内参,那就需要从电泳本身找原因了,导致这个现象的原因很多,比如电泳液,电级电压,跑胶时间,上样人为误差等,就需要多跑几次摸索一下,一次就满意很难。
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问
想用流式细胞术测凋亡,应该用双染法么?代理商给我推荐的BD的这种试剂盒。还请问流式细胞术测凋亡应该注意的tips是什么
balalaLy
操作的时候动作要轻柔,染色后尽快检测
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问
转染microRNA minics失败
Miracle星
1.准备不足做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2.细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。首先,转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3.质粒质量
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问
骨骼肌活检定量分析相关minRNA,如何开展?
Miracle星
试验可以通过设计一个质粒,质粒上含有骨骼肌特异性的启动子,其后跟该miRNA序列。(如果是斑马鱼,可以直接将该质粒通过显微注射的方式注射到斑马鱼的受精卵中,如果是小鼠可以先在细胞水平进行验证,然后在活体水平进行验证)然后将质粒在合适的时间转入你所用实验体系,等待一定时间(自己摸索一下,或者查文献),然后在整体水平以及分子水平对骨骼肌进行评估。实验需要有miRNA组,以及没有miRNA的空白质粒对照
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问
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到?
Eason老歌迷
质谱不是专一性检测的,而是选择样品中丰度较高的蛋白质优先检测,而丰度较低的蛋白质则因为肽段信号过弱被淹没而不能被检测到。因此,如果样品中待检测的目标蛋白质丰度较低(或者蛋白质分子量较小),即使 WB 能够检测到,质谱并不一定能检测到
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问
一种上皮细胞中剪切的caspase3和9丰度不够,如何避免蛋白降解?
Eason老歌迷
可以用0.22um的膜过滤啊,别的膜过滤还是会有细菌存在,0.22的可以达到无菌要求,这样样本因为细菌导致的蛋白降解就不会产生了。
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