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        PCR结果重复不出来是为什么。

        相关实验:长片段PCR实验

        user-title

        小崔正在努力

        我想请问 我的目的片段大小在2800左右,我在进行PCR反应结束时,凝胶电泳结果出现了目的条带,大小也正确。可是奇怪的是,我在以相同的条件PCR时却没有目的条带了,也就是没P出来,有大神知道是为什么吗。

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        5 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        首先,确认你的引物和模版,buffer和Taq酶没有拿错别的。其次,你的引物和模版是如何保存的?会不会因为保存不当而降解了。具体方法就是拿别人的模版或者已知有效的模版再做一次,如果是质粒,可以直接抛个电泳,如果是cDNA之类的,可以用GAPDH之类的做一下看看。第三,用别的仪器做一个对照,看看仪器的升降温是否出了问题。

        user-title

        sophomore

        有帮助

        出现这种情况,一般要先看你的引物设计有没有问题,可以多设计几条引物序列;另外,试剂用的哪一种,整个PCR的体系有没有问题,都要重新梳理,核对,如果试剂有问题的话就重新更换;怀疑目的基因上下游序列有问题,可以多设计几条。再有,根据题主的说明,电泳能出来,那先看看整个PCR体系有没有问题,逐步排除。

        user-title

        Miracle星

        有帮助

        重新再做一次看看是不是这样?

        还有假阴性,不出现!

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        有可能是引物放置时间过长,建议更换新的引物试试

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        可能是以下的问题:

        1重新提质粒。

        2做PCR的阳性和阴性对照一确定系统没有问题。

        3引物问题的可能性比较大。

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