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问
酵母双杂交,蛋白互作?
Eason老歌迷
是不是你的转化率太低啊?)检测感受态细胞效率,标准操作规范。 注意质粒使用量,检查仪器状态。重新配制新鲜培养基,并做对照转化。
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问
蛋白纯化时发现沉淀出现问题?
Eason老歌迷
硫酸铵沉淀是很粗的分级方法,建议你精纯的话还是要过柱子的。
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问
蛋白在纯化时,如何定量?
Eason老歌迷
蛋白质含量方法常见的有以下四种。根据物理性质:紫外分光光度法。据化学性质:凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法(Lowry法)、BCA法、胶体金法。根据染色性质:考马斯亮蓝染色法、银染法。根据其他性质:荧光法。我们实验室更喜欢用考马斯亮蓝染色法。
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问
有人知道做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用?
Eason老歌迷
做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用: 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝在酸性条件下为棕红色,其所含的疏水基团在酸性条件下雨蛋白质的疏水区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成蓝色的蛋白质染料复合物,在5
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问
WB做内参,显影是没有条带
Eason老歌迷
显影没有条带,可能是几个原因,可能是显影操作问题,也可能是是切胶切错了,也可能是你封闭没有封闭好。
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问
wb背景高:有黑点;怎么办
Eason老歌迷
背景脏,可能是因为,你的封闭时间有点短,也可能是你的抗体浓度有点高。
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问
ChIP-PCR阴性对照组和input组的引物应该是哪个基因的引物
天一湖医者
ChIP-PCR阴性对照组和input组的引物应该是目的基因的引物。
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问
细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来吗?
天一湖医者
是的,细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来的。
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问
细胞形状不一样是污染的原因吗?
天一湖医者
细胞形态不一,可能是污染,也可能是细胞老化等。
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问
碱性磷酸酶染色不上色是怎么回事呀
Eason老歌迷
你可以试一试偶氮偶联法。方法很简单: 固定,4%PFA 15min RT,1XPBS洗涤,后即可加染液,染液的配方: Fast red 25mg,a-磷酸萘酚钠 5mg,10%Mgcl2 0.3ml,4.5%Borax液 5ml,dH2O 44.6ml。然后室温孵育,镜下观察结果,待达到理想染色后即洗涤。
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问
DNA病毒用一步法RT-PCR试剂盒扩增有什么影响吗?
whilt-shirt
理论上没什么影响,一步法比较省事
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问
酪氨酸羟化酶(TH)WB跑不出来
whilt-shirt
是不是蛋白没提出来,试试RIPA裂解
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1139 围观
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问
WB一抗保存问题,我们实验室买的碧云天一抗稀释液,稀释后,4℃保存一抗,但是发现一抗用2周就不好用了,有什么办法可以延长一抗使用
sophomore
稀释后如果当时不准备用,一定放在-20℃中。否则一抗肯定会受影响。或者就是现用现配。
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问
请问大家24孔板爬片怎么能把细胞铺均匀呢?
hy-cell
用移液枪打匀后就轻轻放回培养箱静置,不要晃,开关培养箱也轻手轻脚
4 回答
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问
α淀粉酶抑制实验结果超过1是为什么?
Eason老歌迷
前两天刚看了一篇文章,阿卡波糖在一定浓度内对淀粉酶抑制作用良好。可以发给你看,做个参考。
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问
过敏性脑脊髓炎造模失败
Miracle星
建议从头开始,全部重新做一下,数据更准确
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问
请教大神慢病毒转染小鼠BaF3细胞
Miracle星
要不你试一下用逆转录病毒和电转染
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问
流式细胞术的 细胞鉴定
Eason老歌迷
测定表型时先根据细胞群或者细胞亚群的特征表型设门,将其显示于一个流式图上,流式图的一个轴代表一个需要测定的表型的荧光信息,圈出表型阳性的细胞,就可以得出这群细胞或者细胞亚群表达抗原情况,也可以做细胞鉴定。
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问
qpcr如果目的没有差异,会是引物的问题吗?
Eason老歌迷
才半个多月,不可能会失活的,除非你们实验室停电了…… PCR引物要在-20℃或-70℃保存,要避免反复冻融造成DNA降解。我觉得你跑不出差异,可能是差异不是特别明显
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问
细菌菌体内的化合物用什么试剂提取比较好
青梅竹马的青梅
看你化合物的极性,大极性可以用乙酸乙酯,小极性可以用正己烷
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