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蛋白水解度测定,如何操作?
天一湖医者
蛋白水解度测定,常用方法是茚三酮法,利用待测蛋白样品完全水解液做为茚三酮比色的标准样品测定蛋白质的水解度。 水解度( Degree of hydrolysis,DH)代表水解过程中蛋白质肽键被裂解的程度,常用百分数来表示:DH =h/htot× 100%式中,h是水解后每克蛋白质被裂解的肽键数,毫摩尔数(mmol/g)。htot是每克原蛋白质中的肽键毫摩尔数(mmol/g),注意,当蛋白质特指时h
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问
蛋白三维建模,相关求助?
Eason老歌迷
某个基因某处发生了6个碱基重复,导致氨基酸序列中的2个氨基酸重复,这样可以三维建模说明致病性。
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问
酵母双杂交,蛋白互作?
Eason老歌迷
是不是你的转化率太低啊?)检测感受态细胞效率,标准操作规范。 注意质粒使用量,检查仪器状态。重新配制新鲜培养基,并做对照转化。
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问
蛋白纯化时发现沉淀出现问题?
Eason老歌迷
硫酸铵沉淀是很粗的分级方法,建议你精纯的话还是要过柱子的。
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问
蛋白在纯化时,如何定量?
Eason老歌迷
蛋白质含量方法常见的有以下四种。根据物理性质:紫外分光光度法。据化学性质:凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法(Lowry法)、BCA法、胶体金法。根据染色性质:考马斯亮蓝染色法、银染法。根据其他性质:荧光法。我们实验室更喜欢用考马斯亮蓝染色法。
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问
有人知道做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用?
Eason老歌迷
做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用: 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝在酸性条件下为棕红色,其所含的疏水基团在酸性条件下雨蛋白质的疏水区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成蓝色的蛋白质染料复合物,在5
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问
帮忙判断是否污染,Hela贴壁细胞镜下有很多不明小点
天一湖医者
应该是支原体污染,可以看到细胞中有很多空泡样改变。
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问
WB做内参,显影是没有条带
Eason老歌迷
显影没有条带,可能是几个原因,可能是显影操作问题,也可能是是切胶切错了,也可能是你封闭没有封闭好。
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问
wb背景高:有黑点;怎么办
Eason老歌迷
背景脏,可能是因为,你的封闭时间有点短,也可能是你的抗体浓度有点高。
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问
请问细胞在无血清高糖培养基环境中合成酪蛋白的时间大约能维持多久?
Eason老歌迷
这个要看你的细胞数量和状态,一般高于24h。
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问
神经干细胞具有多向分化和更新的潜能吗?
Eason老歌迷
具有多向分化和更新的潜能。干细胞是存在于机体内的一类具有无限自我更新复制以及多向分化潜能的细胞群体。
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问
原代成纤维细胞传代后 飘了好多 黑色团块 培养基清澈 但仔细看有流沙样
Eason老歌迷
感觉还是传代时消化过头,以至于细胞老化(胞浆出现明显黑色颗粒是细胞老化的标志),现在我采取的消化传代方法是:1,先用PBS细两遍,以去除残余血清对胰酶消化的影响2,加适量胰酶(以能铺满瓶底为宜),镜下观察见饱体回缩时即倒去胰酶3, 利用剩下的一点点胰酶再消化,此时可以放入37度温箱中4,隔半分钟到一分钟将细胞拿出,侧拍瓶壁(用力),镜下可见细胞基本都已掉下来,此时可以加含血清培养基中和,再用吸管吹
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问
ChIP-PCR阴性对照组和input组的引物应该是哪个基因的引物
天一湖医者
ChIP-PCR阴性对照组和input组的引物应该是目的基因的引物。
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问
细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来吗?
天一湖医者
是的,细胞固体培养基和液体培养基是根据每种细胞类型来的。
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问
细胞形状不一样是污染的原因吗?
天一湖医者
细胞形态不一,可能是污染,也可能是细胞老化等。
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问
碱性磷酸酶染色不上色是怎么回事呀
Eason老歌迷
你可以试一试偶氮偶联法。方法很简单: 固定,4%PFA 15min RT,1XPBS洗涤,后即可加染液,染液的配方: Fast red 25mg,a-磷酸萘酚钠 5mg,10%Mgcl2 0.3ml,4.5%Borax液 5ml,dH2O 44.6ml。然后室温孵育,镜下观察结果,待达到理想染色后即洗涤。
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问
DNA病毒用一步法RT-PCR试剂盒扩增有什么影响吗?
whilt-shirt
理论上没什么影响,一步法比较省事
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问
WB一抗保存问题,我们实验室买的碧云天一抗稀释液,稀释后,4℃保存一抗,但是发现一抗用2周就不好用了,有什么办法可以延长一抗使用
sophomore
稀释后如果当时不准备用,一定放在-20℃中。否则一抗肯定会受影响。或者就是现用现配。
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问
请问大家24孔板爬片怎么能把细胞铺均匀呢?
hy-cell
用移液枪打匀后就轻轻放回培养箱静置,不要晃,开关培养箱也轻手轻脚
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问
请教大神慢病毒转染小鼠BaF3细胞
Miracle星
要不你试一下用逆转录病毒和电转染
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