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问
WB曝光时间为什么不一样
Eason老歌迷
没事,正常现象,wb显影可以据信号的强弱适当调整曝光时间,你选一个显影效果最佳的时间即可。可能是你的抗体用时间长了的问题,或者你没有放-20℃保存好
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问
HIF-1α蛋白纯化!!!
Eason老歌迷
做过,可以做出来。但是吧,GST融合蛋白容易氧化形成二聚体,影响纯化效果,所以经常会在结合及洗脱缓冲液中添加1-10mM DTT,效果才会好。
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问
生长曲线 细胞
bamboopiggy
这个看你测细胞浓度用的是什么方法,如果是cck8/mtt的话,如果你的酶标仪在无菌环境中的话,你可以用一块板。如果是在普通环境,你就需要一块板,一个时间点
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问
流式分析得到这样的图,该怎么解决。
Eason老歌迷
有几个原因,可能是你没有正确的使用活性染料。可能是没有正确地设置PMT电压。
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问
低丰度蛋白跑western blot
whilt-shirt
增加上样量至10-20ul,一抗稀释比例提高到1:500试试
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问
求助,percoll分离骨骼肌干细胞不分层
Eason老歌迷
我是这样操作的,你可以参考一下。1.用percol将10XPBS稀释为1X (得到的我们暂且称100% Buffer A好了)2.再用无血清的培基去稀释100% Buffer A为2份,一份为75% Buffer A,另一位为35% Buffer A3.肝脏细胞离心后得到沉淀,去除上清后,先用35% 的Buffer将其冲悬,接着用移液*将75%的Buffer缓慢从底部打出,期间可以看到75%与35
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问
阳性杂交瘤细胞培养
Eason老歌迷
你这个明显是细胞污染了,你可以先用显微镜观察,看看它有没有游动,我感觉是真菌污染。
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问
求助:小鼠mcao模型
Eason老歌迷
可以给你分享几个我当时做实验总结下来的小技巧。一是线栓不可过硬。过硬线栓容易找手感,但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管,导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态,当线栓插入血管以后,因为线栓过硬,血管肌张力无法使得线栓改变形态,只能被线栓改变形态,导致血管处于紧绷状态,对于再灌注操作不利。二是选择硅胶头尽可能接近圆柱形的线栓,这样当线栓进入MCA外后,能够完全堵塞MCA,而不会出现缝隙,使得线栓
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问
小鼠血清能用PBS稀释吗?
whilt-shirt
PBS是等渗溶液,理论上是可以的
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问
vx2荷瘤兔接种问题
Eason老歌迷
我个人更喜欢组织块方法,它虽然慢一些,但是成瘤快一些,而且效果也很好。
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问
求助如何降低2-VO大鼠模型死亡率
Eason老歌迷
如死亡过高,造模可分次进行,逐渐加量摸索为宜。
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甘氨石胆酸灌胃大鼠模型
Eason老歌迷
做过,8mg/ml,0.25ml灌胃
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问
木瓜蛋白酶-sevag法怎么除多糖蛋白啊
Eason老歌迷
可以试一下阳离子交换柱色谱除蛋白。
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问
原核诱导蛋白,相关问题求助?
Eason老歌迷
诱导的蛋白只在沉淀中,上清中没有,这个现象很正常,我也遇到过。你可以提前去biotech上查看预测蛋白可溶性问题。在或者看你的外源蛋白是否含有稀有密码子,如果有的话建议使用Rosetta表达菌株。
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问
高尔基染色
Eason老歌迷
高尔基染色的话,动物不能灌注,因为灌注会造成阴性结果。我们都是直接处死动物以后取脑组织,水洗一下,放入1、2混合液,24小时后换液,注意避光,室温放置14天。我觉得你说的这个沉淀其实对实验结果并没有太大影响。
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问
求助 冰冻切片老是碎怎么办?
Eason老歌迷
切片如果老是碎,切之前用手捂一下冰冻切片表面,可能是组织冻得时间太长,导致太硬。
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问
肺炎克雷伯氏菌感受态细胞总是电转不成功,请问OD值是需要摇至0.5还是要更高,因为0.2
府宅
制备感受态细胞主要是控制细胞在对数生长期就可以了,一般来说OD值在0.4到0.5,长到OD值0.4~0.5的细胞摄取DNA的能力比较强,不需要更高。
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问
谁能够帮我解答一下肺炎链球菌D39、R6、ATCC49619的区别吗?
dxy_gwrp7ndq
D39”“R6”这些都是这些菌株的发现者给它们的命名。ATCC的菌株是模式菌株,在菌株保藏机构稳定保藏,保藏时间长,也需要传代,防止其变异,一个碱基的变化就变成了另一个菌株。NCBI上有Streptococcus pneumoniaeD39,Streptococcus pneumoniaeR6的全基因序列,可以拿来设计引物用ATCC49619当作模板进行克隆
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问
质粒表达和染色体表达有什么区别
dxy_gwrp7ndq
这是由于染色体DNA携带的基因所编码的产物,在细菌新陈代谢中是生存所必须者;而质粒携带的基因所编码的产物并非细菌的生存所必须者。因此质粒可以在细菌间传递与丢失
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问
怎么找或者预测谷氨酸棒杆菌某氨基酸转运蛋白呢
府宅
可以通过上调氨基酸水平应用实时定量PCR证明其是否受存在转运蛋白。再利用绿色荧光蛋白与其构建融合蛋白,确定转运蛋白所在部位。
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