实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问 wb总是两边泳道条带颜色浅。

Eason老歌迷

可能是转膜的时候夹子没夹紧，导致两边转膜不完全。

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问求助大佬，跑肝组织stat6总蛋白和磷酸化蛋白趋势相反，这能解释的通吗？

bamboopiggy

有的时候，总蛋白会和磷酸化的蛋白变化趋势是一致的，看你的结果，可以总结为模型使stat6的磷酸化下降，而加药后，会抑制总的stat6的蛋白，但是会使磷酸化增高。来rescue

4 回答659 围观

问求助|大家是怎么提组织样的总蛋白的？

bamboopiggy

1.你取了中肠以后，先用pbs洗一下，然后直接放入lysis（+cocktail）中，研磨，研磨过程中全程冰上放置。研磨完以后，冰上放置5-10min，然后再离心，然后再加上样buffer煮。2，如果还是做不出来，可以考虑用液氮快速快速冰冻，然后用研钵研磨，然后加入lysis，冰上放置5-10min，然后再离心，然后再加上样buffer煮。

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问酵母单杂交

Eason老歌迷

转化后如果是过夜就取出来的平板，菌落可能不会长得很大。主要还是要看放置一段时间后，菌落形态是否有变化（可以在37C继续培养，如果怕长过了，也可以放在室温下）。如果还是保持原来的状态，或者长出来更多的小菌落，则很有可能是污染。如果菌落明显在生长，而且透明度也变化了，应该是正常生长。另外，如果这一批菌生长速度明显低于平常，需要考虑是不是抗性加高了，或者IPTG加高了，抑制了菌的生长。最后如果形态与平常

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问请问各位大佬有知道SaKKH ABE8e NG ABE8e的具体用法区别吗？麻烦指点一下！谢谢

Eason老歌迷

具体参看 Jennifer Doudna 在 Science 杂志发表了题为“ DNA capture by a CRISPR-Cas9–guided adenine base editor ”的文献，讲的很详细。

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问肝纤维化造模

Eason老歌迷

一般造模方法是，成年雄性小鼠，按5ml/kg体重的剂量皮下注射20％CCl4茶油溶液，每5天一次，连续3个月。或成年雄性大鼠，皮下注射60％CCl4花生油溶液3ml/kg体重，首剂加倍，每周2次，共9周。它如果有胀气，我感觉可能是你皮下注射打到肠腔了可能。

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问疑难求解答

bamboopiggy

确定阻断剂没有坏，用的浓度达到参考浓度，甚至稍微高一点。

3 回答252 围观

问无水硫酸钠柱是什么，一般是直接购买还是需要自己制作

你好几和户

是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的，都是购买的。

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问质粒转染遇到的几个问题

bamboopiggy

1.慢病毒的质粒不能作瞬转，因为包慢病毒还需要几个包装质粒。2，原因同1.3，扔掉，重新作，一般作慢病毒的shRNA的序列都是公司直接合成的，除非是合成有问题，否则不会出现突变。

3 回答964 围观

问萌新研究生实验求助，beas-2b培养求助？

Eason老歌迷

我们也是用的10％血清+DMEM(高糖)+双抗。如果你的细胞长的很慢，考虑可能是你复苏时候没有复苏好，细胞老化了它就长的慢。如果它是贴壁细胞那就必须用胰酶消化，然后用显微镜观察，变圆了就可以好吹打下来。

3 回答970 围观

问用山羊的cDNA为模板克隆，为什么blast结果会得到鹿的染色体？

jack劲

第一，你要在前面进行blast的界面，有一个选择物种的地方，手动输入自己物种。选择物种之后再进行对比这样一般没有其他的物种了。第二，确实有些基因组有一些相似性。你不能完全忽略。

3 回答425 围观

问请问，目前mhcc97h还能用于细胞功能实验？

bamboopiggy

MHCC97H细胞，我可以确保是人的肝癌细胞系，没有被鼠污染。因为我用抗人的抗体可以杂出某个蛋白，但是用鼠的没有杂出来。

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问颗粒细胞

whilt-shirt

理论上是可以的，但是注意胰酶消化过长会导致细胞活性减弱

2 回答485 围观

问肿瘤细胞，流式，检测凋亡，BDC6流式细胞仪，试剂盒Elabscience

whilt-shirt

有可能是试剂原因，建议更换试剂后再试试

2 回答190 围观

问edu中间一块圆形区域没有染上

Eason老歌迷

可能是出现了环岛效应，表现为连成片的细胞最外环的边缘的细胞荧光强度明显高于被包围在中间的细胞的荧光强度。可能是染色时细胞接触染料的面积、生长在边缘和中间细胞的细胞膜状态不同，也可能因探针跨细胞膜能力不够、探针分布不均匀、标记的温度和时间等条件不当。

3 回答218 围观

问细胞培养基浑浊想请教一下是什么污染？以前没有见过

whilt-shirt

有可能是真菌污染，建议细胞间、培养箱重新灭菌后再开展实验

3 回答512 围观

问求助大鼠心肌缺血再灌注损伤模型

bamboopiggy

你先开3-4肋间，然后钝性分离，尽量不要太多的去剪除肌肉。可以用钳子稍微撑大一下切口，但是不能去钳夹心脏。

3 回答432 围观

问如何去除变性脂肪导致的荧光背景呀？

天一湖医者

向活细胞成像样品中添加几滴背景抑制剂，可以去除变性脂肪导致的荧光背景。

2 回答183 围观

问BV2细胞污染问题

Eason老歌迷

你换液继续培养后就观察到细胞间较干净。然后又复苏了较早的细胞，依然观察到污染问题，那就说明还是你之前冻存的细胞问题。

3 回答988 围观

问为什么我的常规PCR跑胶结果最下面有两条带呀，最下面那两条又是什么东东呢😂，我的目的基因是1000bp左右的

jack劲

应该是引物二聚体最下面的，会呈模糊状态。而另一个可能是相似的扩增出来的条带，你在设计引物前最好是去ncbi上比对一下这样就不容易扩增到其他条带。

6 回答1005 围观

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