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        蛋白原核诱导表达与纯化

        user-title

        dxy_u3c61zt6

        诱导出来的蛋白挺多的,但是纯化出来浓度很低,大部分蛋白都在穿流液里,蛋白与beads (碧云天his-tag)结合的不好,尝试降低洗beads 时咪唑的浓度,还是不行,求解答

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        4 个回答

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        问题是蛋白挂柱不好。两个因素填料和蛋白

        1.填料是否有问题,把镍剥离,再挂一次

        2.蛋白his暴露的不好,his超级小,容易被卷进去:

        A.看下his是在N端还是C端,

        B.更换不同体系缓冲液

        C.可以考虑两段都加个his

        D.如果实在不行,换成gst标签

        user-title

        仙人掌spp

        有帮助

        考虑更改蛋白纯化缓冲液或者换洗脱的beads吧,在穿流液里的话跟洗涤关系不大了

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可以加大beads的量,然后洗脱,再浓缩一下

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        可以 提高SDS-PAGE的上样量 ,将蛋白样品超滤浓缩几倍提高浓度, WB压片时间稍微延长一点。

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