关于PLKO.1测序

多挑几个菌落试试，我试过一个板反复测了几次，最后才测成功

PLKO质粒构建，插入的片段也就是50-60bp，测序能测出300多，足够了啊，如果正向测不出来，也可以反向测测试试。

可能是因为发卡结构测序不通导致的。可以选择CTCGAG作为loop环，它本身就是酶切位点，再选择其他合适的一个位点进行酶切鉴定就能确认是否有插入了。一般不会插错或者有突变。