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        做了原核表达,跑了SDS-PAGE但是看不出来差异,所以做了个WB但是全是非特异条带,是怎么回事

        相关实验:原核细胞体外翻译系统

        user-title

        笋干CAU

        载体是pET28,大肠杆菌是BL21(DE3)使用LB培养基。天然目的蛋白大小83kDA,融合蛋白88kDA。 图片描述图片描述图片描述1空载,2诱导前,3-5IPTG浓度梯度,6诱导前,7-9IPTG浓度梯度。

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        4 个回答

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        第一张图 在100kd位置,是有条带表达的,表达量不高,但有

        第3张图,28a载体的标签是his,his抗体的特异性很差,所以不要用his去做wb

        确定是上清还是包涵体后,摇个大样,过下柱子

        user-title

        dxy_771zvlc

        有帮助

        蛋白是否可溶呢?SDS-PAGE的样品是上清还是沉淀。如果是上清,那有可能蛋白在包涵体内。如果是上清,看着染色胶蛋白应该是有表达的,WB可能没有杂交出来。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        感觉你还是没有诱导出来,一般考染就能看出来表达量高的。如果考染没有,说明你的表达有问题。

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        你这个结果很显然目的蛋白就没有表达,空载和对照都没差异,建议重新构建质粒重新转化。

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