实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问为什么石蜡切片切出来的很多皱褶呢？

balalaLy

石蜡块温度偏高就会起褶，继续冷冻一下

5 回答2514 围观

问做elisa发现大部分样本od值均小于空白孔od值是怎么回事呀，做过两次，换了样本，且步骤是按照说明书做的

whilt-shirt

有可能是样本出问题了，建议重新提取样本

3 回答627 围观

问求问各位大佬，大鼠脾提淋巴细胞进行体外排斥反应模型

Eason老歌迷

还可以加比如说，ifn-gamma啊等等。96孔板铺板细胞数，那要看你实验具体情况，一般我们是1500～5000个每孔（100ul）。

1 回答293 围观

问皮肤石蜡切片染色组织全碎了

whilt-shirt

这种情况有可能是脱水时间过长导致的

3 回答1273 围观

问求助WB内参不齐

whilt-shirt

可以用image j计算灰度值后调整上样量，缺的部分用2x的loding buffer补足

3 回答2640 围观

问免疫组化：着色部位不对是什么情况？本是胞浆抗原，但实验显示结果却在胞核有着色？

Eason老歌迷

做了几次实验呢？可以多做几次，可能是你的染色过程有问题。

3 回答361 围观

问显微镜视野中不是细胞的部分也有荧光信号的原因是什么？怎么解决啊？

Eason老歌迷

可以调整一下显微镜的曝光时间，补偿时间等。

3 回答246 围观

问蛋白提取问题细胞蛋白提取

冷泉港蛋白

正确做法：加入上样缓冲液，煮十分钟，分装，尽早跑WB,暂时不用的放于-80度冰箱。为什么这样做：1.煮的作用：可以破坏蛋白的疏水和氢键，破坏高级结构，使蛋白变性。2.上样缓冲液的作用：含有还原剂和SDS，还原剂破坏了二硫键，SDS破坏疏水，从而实现变性蛋白的目的。3.低温的作用：降低温度是为了减缓分子运动，降低碰撞，减缓目的蛋白的降解，因此温度越低越好！4.负80度，还存在分子运动，所以应该先变性

6 回答3327 围观

问免疫共沉淀—磁珠成团啦，咋整？

Eason老歌迷

可以重悬试一试。倘若磁珠形成团聚，导致磁珠的表面没有完全暴露出来。如果该问题出现在早期的生产步骤中，则会导致涂层的不均匀；如果发生在后期，就会导致试剂反应性有较大的差异。

4 回答3910 围观

问免疫组化：出现切片边缘着色的现象，可能是什么原因导致的？我应该怎么避免呢？

府宅

切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。试剂要充分覆盖组织，尽量避免选用坏死较多的组织。

3 回答572 围观

问做乳腺组织的免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜看很好，有阳性信号，但是拿到荧光镜下看，我的阴性对照一片绿，像非特异性染色，哪个是真的

whilt-shirt

有可能是荧光显微镜波长不太对，以共聚焦为准

3 回答260 围观

问用抗原诱导机体产生不同用途抗体时，对相应抗原有什么要求？

冷泉港蛋白

一、我想总体的原则应该是：1.抗原（免疫原）应尽可能的与检测对象的构象保持一致！2.纯度当然越高越好了，起码要达到80%二、对抗原的要求（根据抗体用途进行分类）：1.wb用途，我们检测的是变性的抗原。免疫原也最好是变性的，很多情况下我们拿不到足够多检测对象去做免疫原，就得考虑基因工程了，当然还涉及到表达系统的问题。最好能沟保持一致2.IHC用途，经过多聚甲醛固定之后的抗原，介于天然与线性之间了。考

3 回答379 围观

问RNA的检测

Topmicro

你有没有做阴性对照，看看每次的阴性对照一样吗

2 回答406 围观

问小鼠骨髓染色体畸变，出问题了，求助啊

大草原的小灰驴

可能是染色体制备后，在滴片步骤时候没有掌握好合适的环境温湿度，采用的冰片还是冰水片或分散仪，滴片后是否过火等操作细节问题。另外再检查一下培养过程的环境等条件控制，试剂和培养基是否失效。

2 回答557 围观

问只要是荧光抗体就可以⽤于共聚焦显微镜吗？

guofei11227

是的，有荧光抗体就可以用于共聚焦显微镜

4 回答300 围观

问请问流式检测膜蛋白表达的变化用多克隆抗体出结果的机会大吗？

此用户已注销

抗体只是针对相应抗原的，⾄于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并⽆明显影响，你只需要查清楚到底是针对哪⼀个部位的抗原的，应该是可以⽤同⼀种抗体进⾏检测的，在流式操作时只需注意：如果是针对胞内，则需要加破膜剂，让抗体能和相应抗原接触，否则就不需要了。

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问小鼠外周血进行流式细胞术鉴定细胞分型，为什么线性图看不到分群但是对数图可以？

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细胞分不开的因素有个人认为有以下因素（1）抗体的特异性不好（2）选的单标不合适，若细胞本身抗原就低表达，若还选择弱荧光的FITC那估计确实难以分开（3）前处理有问题，这点我自己感触很深，因为我刚做流式的时候单标抗体也分不开，后来经过好几次摸索才将细胞分开的，细胞一样，抗体也一样，就是前处理不一样。（4）仪器参数的设置，这个一般操作人员的技术比较高应该不会有多大问题，不过我们一般做的时候都会加一个同

2 回答1629 围观

问PSA-NCAM，A2B5磁珠分别分选的什么细胞

冷泉港蛋白

1.说下PSA-NCAM:分离PSA-NCAM的阳性细胞，即细胞膜有该分子的细胞，比如Neural cells，厂家的阳性对照做的是该细胞厂家说明书（下图），你可以查下：2.如何查询这些信息：A.登陆数据库 UNIPROT 输入目的蛋白，找到expression.B.查询提供分离磁珠的厂家，说明书会有C.查文献

4 回答709 围观

问免疫组织化学的对照怎么设置

此用户已注销

做相关抗体预测实验，弄清楚抗体浓度，最好同时做抗体阳性和阴性对照

3 回答845 围观

问chip 实验

此用户已注销

图像质量有点差，看不特别清楚。而且你这个是条带没出来。你有没有做input阳性对照啊。

3 回答705 围观

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