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求助,WB曝光出来整张膜都是黑色,同样条件的内参就还能看
府宅
一抗和二抗浓度降低,TBST多洗几遍看看是否改善
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问
求助,为什么我的SDS跑蛋白脱位那么长🙏
Eason老歌迷
拖尾现象是电泳中最常见的现象,这常常是由于样品溶解不佳引起的,解决的办法是在加样前离心,选用合适的样品级冲液和凝胶缓冲液。或者是降低凝胶浓度。
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问
TGF诱导HK-2,48h后细胞掉了,求大神指教
Eason老歌迷
如果要是正常组也死掉了,可能就是你细胞培养的问题,是不是培养基问题,或者是传代细胞老化了。
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问
细胞内吞
Eason老歌迷
查看了一下相关文献,确实是37℃抗体被内吞了,而不是所谓的从细胞上掉下来了,所以放心做吧
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问
WB实验
Eason老歌迷
你这可能是非特异性条带,可以选一个特异性比较高的抗体,或者是你封闭时间久一点。
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问
Co-IP 泛素化条带
Eason老歌迷
没有出现拖尾条带,而是单一条带,你是不是抗体用错了啊?至于泛素化质粒的构建你可以参看这篇文献,我也是按照这个方法来的“强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因表达质粒的构建”
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问
tunnel凋亡试剂盒的使用
balalaLy
tunnel跟你要染的一抗二抗是两个实验,一般做tunnel都会单独做,因为不好染,假阳性多,你再加染个一抗,步骤有多了,相互影响。及时一起染,也是先染一抗二抗,后面再染tunnel
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问
三次elisa结果均不一致,之前没有出现或者这样的情况,阳性越来越少是什么原因
Eason老歌迷
三次用的都是一批次的试剂吗?不同厂家的试剂一定不能混用,包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异,还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。同时要注意试剂的批号和出厂日期,虽然试剂的有效期多为 1 年,但随着时间越长,试剂盒里的有效成分会有一定的衰减,尽量选择离出厂日期较近的试剂盒。
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问
死活染颜色的固定了之后可以保存多久
此用户已注销
如果不能及时上机检测,可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min,清洗细胞,之后用适量的Stain Buffer重悬细胞,4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。前面已经做过类似固定步骤(例如固定破膜)的细胞如果能确保24h内上机,实际上无需再次固定。如不能,推荐再次固定以稳定胞内抗体的结合。
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问
同等条件下免疫荧光染色为何有组织无荧光或荧光差异?
Eason老歌迷
虽然是一起做的,但染色过程不是同时进行,还是有差异的吧,可能有的样本染上色了,有的就没有染上色。
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782 围观
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问
抗原修复后DAB无显色
申东熙老伯
背景都没有片子都白了就是脱片。抗原修复结束一定要冷却。
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804 围观
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问
免疫荧光切片是否可以用流式抗体染色?
Eason老歌迷
流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话,在同等条件下,当然选择做荧光抗体啦,但实在没有,流式抗体还是可以用的,不过最好马上去荧光显微镜下看结果,时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色,效果还可以。
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问
多重免疫荧光出现通道串色的情况,如何降低串色跟非特异性荧光着色!
陈皮712
1. 选择波长差异较大的染料;2. 在仪器上调好校正,或者在流式相关软件上进行调整(如flowjo的校正矩阵);3.关于非特异性着色,首先细胞跟抗体孵育后,充分用PBS清洗,并选择着色特异性较好的抗体品牌,必要时染完一种色后进行封闭处理。
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问
多糖的免疫调节活性,有几点问题?
Eason老歌迷
你就可以参看这篇文献,这个综述讲的很详细。“分子修饰对多糖免疫活性影响的研究进展”分享给你。
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问
石蜡包埋,蜡块出现裂纹
Eason老歌迷
可能是你的蜡的韧性不好。你可以加少量的蜜蜡;或者将一般石蜡反复融解、凝固,直到蜡由白色变成微黄色为止。处理好的蜡有韧性,在漂片时可以抻得很舒展,那些微小的皱褶几乎都能打开。
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问
4T1细胞复苏后贴壁形态和Atcc上细胞图不大一样,请大神指教!急
balalaLy
4T1细胞就是这样喜欢叠着生长
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问
细胞反复复苏反复污染,有没有解决办法呀,头疼,也不知道是什么污染,传2-3代,细胞
陈皮712
先检查培养箱、培养基、耗材(培养瓶等)是否有污染,细胞实验操作是否规范。反复冻存复苏恐怕不能解决污染问题,并且还会给细胞带来巨大的伤害。如果是贴壁细胞,可尝试以下方法:先将细胞消化下来,加入20%双抗完全培养基(10ml培养基+2ml双抗)终止消化并重悬,浸泡10分钟,1000rpm离心5分钟,弃上清。再加入20%双抗PBS清洗(10mlPBS+2ml双抗),1000rpm离心5分钟,重复2次。随
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问
20g小鼠眼球采血只有不到0.6ml 分离血清只有100ul多,请问有什么更好的采血方式呢?
Eason老歌迷
摘眼球取血,是大家常用的方法,简单、易操作,取血量大,当然缺点就是过于残忍还有就是心脏采,用1毫升的针管,也能采到将近1毫升,当然需要练练第三,可以麻醉了以后(用乙醚就可以),腹主动脉取,也用1毫升的针管子,采血量也很大。
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问
请问奶牛乳腺上皮细胞在有血清培养环境中,培养基中酪蛋白浓度随时间的增加会如何变化
Eason老歌迷
奶牛乳腺上皮细胞在有血清培养环境中,培养基中酪蛋白浓度随时间的增加,会先维持一段时间不变,然后慢慢下降。
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问
CCK8对照组细胞存活率
Topmicro
做的平行对照吧,多次重复实验总会有误差
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