实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问某疾病的热点致病突变位点该如何寻找

府宅

可通过基因突变数据库如果想知道一个基因与哪些疾病有关或者某一种疾病与哪些基因有关,都可以在OMIM中查询。

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问NCI-H716细胞分化问题

dxy_gwrp7ndq

基质胶可以有效帮助上皮细胞等各类细胞的附着和分化

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问不懂就问，为啥上样会出现这种情况?以前上样没遇到过

麻黄连翘赤小豆

上样量太大造成的拖尾电泳跑太快缓冲液用太久可以调整新的看看蛋白降解

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问我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？

麻黄连翘赤小豆

如果是蛋白提取液的话，有沉淀说明蛋白提取出来了，很清亮说明里面蛋白含量少，都看不见

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问WB中浓缩胶的量一般是多少，蛋白跑出浓缩胶后没有浓缩成一条线，而是拖的很严重是为什么，该如何解决

府宅

拖尾原因：1.上样量不均，从内参就能看出，建议检测总蛋白浓度后调节至相同用量如50ug；2.可能与蛋白变性、凝胶质量、电泳条件、封闭条件、抗体特异性有关，建议调至相同浓度后变性，可进行80、120v电泳，室温封闭2-3h，降低一抗浓度（增加稀释倍数），可降低所用蛋白总量。

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问请问如何把ph等于5.5的Tris—HCl调成8.3的？

Topmicro

你这废了，不只是pH不对，浓度也不对，重新配置吧。

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问泛素化，泛素分子与靶蛋白什么位置结合？

你好几和户

泛素添加到靶蛋白cyclin E和β-Catenin泛素化的过程进行研究，这两种靶蛋白能够控制细胞的周期。泛素活化酶E1激活泛素并将其转移到泛素交联酶E2上，随后泛素连接酶E3识别特定的需要被泛素化的靶蛋白，并将泛素从E2上转移到靶蛋白上。

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问养小鼠血管内皮细胞，种六孔板上，第二天出现很多小白泡，请问什么原因？是感染？碎片

Eason老歌迷

是细胞死亡或正在死亡中裂解后形成的空泡，应该是什么操作或培养条件变化导致细胞状态变差、死亡。

2 回答229 围观

问鼠尾胶原配置

Eason老歌迷

121.3℃,时间维持15~30分钟。

2 回答443 围观

问求助：无血清培养基中本身含有酪蛋白吗？

你好几和户

一般没有酪蛋白的，可能有如纤连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）这些。

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问【求助】拟南芥侵染后，种子筛选技巧

Eason老歌迷

我在实验室如果在培养基上点，一般用灭过菌的牙签，将牙签蘸一下培养基，就会有粘性，可以一粒一粒点种子，至于怎么将拟南芥点整齐，一般在培养皿下面垫一张划着直线的滤纸，沿着直线点就可以了。蓝色枪头一般用在将种子直接点在基质上。

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问鱼类肝细胞原代培养，有大佬使用M199/L-15混合培养基的吗?比例是多少?

此用户已注销

将0.25%的胰酶消化液与L_15培养基按1:1的比例

3 回答352 围观

问寻求帮助!slot blot

Eason老歌迷

我们是用凝胶成像仪，你可以试一试。

1 回答263 围观

问眼球取血的EP管需要灭菌吗？组织存放的冻存管用于wb等实验的需要灭菌吗？

Eason老歌迷

眼球取血的EP管不需要灭菌。组织存放的冻存管用于wb等实验的不需要灭菌。

3 回答919 围观

问为什么我的内参跑不出来呢？？

是付先生的小可耐

1.提的Rna有问题2.引物设计不对3.加样问题

5 回答1193 围观

问请问人Tp53和鼠Tp53的同源性如何？

冷泉港蛋白

上图是在线数据库Uniprot的比对结果，小鼠蛋白和人蛋白的序列同源性，本就很高。要看你的实验目的，如果你要用抗体区分两个蛋白，就只能用同源性最低的那段序列了。如何进行氨基酸比对：A.在线数据库，如uniprot,NCBI等。B.序列比对软件 DNAman,bioxm等

3 回答473 围观

问想请教一下人皮肤成纤维细胞HDF,HFB,HSF等细胞之间的区别是什么

此用户已注销

细胞的特性还有活性不同、还有结构

2 回答4716 围观

问细胞是100%阳性却出现分群

此用户已注销

培养的细胞出现污染、细胞自身表达荧光蛋白基因、药物处理后都可能出现某通道上有阳性表达。

3 回答504 围观

问COIp实验中，如果分子是55kda的话，曝光一直有杂带，怎么办呀

dxy_yrovq1i9

买去重链的二抗。稀释二抗浓度，或者换SDS-PAGE胶的浓度，把重链和IP条带那个位置分的开一些，就能截图了。

3 回答742 围观

问PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢？

dxy_yrovq1i9

蛋白太大了，GST不好表达。把GST标签换成His吧，基本可以一把出。

3 回答564 围观

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