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        求助:把目的基因连接PET32a的质粒转化入BL21中,有单菌落,但是摇不起来是怎么回事呀

        相关实验:用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

        user-title

        小熊小熊心情好

        我去年就将连接了pet32a的目的基因导入了BL21中,可以表达出蛋白,但是等今年想重新表达蛋白的时候,怎么样都诱导不出来了。无奈重新将质粒导入BL21中,三个板子只涨了两个菌,菌落PCR都有条带,而且很亮,但是怎么都摇不浑浊,培养基非常清澈,请问是啥原因啊,有解决的办法吗?

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        爱吃水稻的小呆瓜

        有帮助

        1.检查抗生素有没有弄错;

        2.看一下这个质粒是多大,目的基因是多大,如果相对比较长的话,长的会比较慢,我之前一个8k的载体,连了一个11k的片段,长了三天才有;

        3.摇床的频率和温度是不是对的,有些菌要左右晃,有些要转圈晃

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你没有加错抗生素吧?这个最怕的就是加错了抗生素。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1、挑取的单克隆是空的大肠杆菌;

        2、摇床温控实效,虽然摇床上温度显示为37度,但实际上可能不止37度,你最好用温度计测量一下工作时摇床的温度。

        另外,你可以取试管中的菌液划平板后再挑单菌落,接种后再摇菌看看。

        user-title

        府宅

        有帮助

        摇的时间太短了,幅度调大,多摇一会儿

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